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大型層析柱的特點(diǎn)及簡(jiǎn)介

閱讀：4904 發(fā)布時(shí)間：2017-5-17

大型層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體，一般用玻璃管或有機(jī)玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時(shí)應(yīng)將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外，直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關(guān)。大型層析柱

　　以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例

　　中壓分離層析柱操縱方法

　　以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例

　　1 吸附劑的處理及柱子裝填

　　將一定量薄層層析硅膠裝人搪瓷盤置于烘箱中，取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充，填滿整個(gè)柱體，不留死體積，密封后用柱塞式計(jì)量溶劑泵按丙酮一石油醚比例泵人溶劑，至溶劑流出止。

　　2 上樣

　　3 洗脫

　　至洗脫*，相同流份合并，回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加人適量甲醇熱溶后自然放置，析出結(jié)晶，為冬凌草甲素。

　　4 層析柱再生、平衡

　　5 重結(jié)晶

　　冬凌草甲素結(jié)晶析出*后，減壓過濾，然后用少量甲醇洗滌(洗滌液保存，作下次熱溶冬凌草甲素用)。將冬凌草甲素再用適量甲醇熱溶后放置，結(jié)晶再次析出，待結(jié)晶*后，抽濾，用少量乙醚洗滌，將結(jié)晶室溫下晾干后置真空干燥箱中，真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。

　　6 薄層層析分析

　　表明在該展開系統(tǒng)下，冬凌草甲素樣品和對(duì)照品都具有相同的RF值，并呈現(xiàn)出同樣的藍(lán)綠色斑點(diǎn)，在制備的冬凌草甲素樣品中，沒有雜質(zhì)斑痕。大型層析柱

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