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標簽： 生物素 酰化 探針
在標準的切口平移實驗體系中，生物素-11-dNTP取代了dNTP，DNA酶I 的濃度調整到可生成長100~500個核苷酸的范圍，其他生物素酰化的核苷酸也可代替生生物素-11-dNTP。
實驗方法
- 切口平移法
- 隨即寡核苷酸引物合成法
| 實驗材料 | DNA |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | DNA聚合酶 dNTP 2-疏基乙醇 生物素 NaCl EDTA SDS 無水乙醇 |
| 儀器、耗材 | 注射器 電泳儀 離心機 培養箱 |
| 實驗步驟 | 1. 混合以下物質于100 μl 反應體積：
3. 加樣于瓊脂糖凝膠，同時帶對照分子量標準，在15 V/cm 電壓降下電泳。
4. 消化的DNA大小介于100~500 bp 之間，接步驟5繼續，若大小在500~1 000核苷酸之間（或更大）加入第二份DNA酶Ⅰ繼續溫育。
5. 加入2 μl，0.5 mol/l pH8.0的EDTA和1 μl 10%SDS，68℃加熱10 min 終止反應和滅活DNA酶Ⅰ。
6. 在1 ml 注射器中準備如Sephadex G-50離心柱，用2 ml 無水乙醇清洗注射器和硅化的玻璃棉。
9. 用比色法估計生物素酰化反應的程度和探針的質量或進行化學發光檢測。 |
