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離心機(jī)---差速離心簡介

閱讀:10320      發(fā)布時(shí)間:2019-8-9
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      差速離心

    差速離心法是利用樣品中各種組分的沉降系數(shù)不同而進(jìn)行分離的方法,又稱差分離心或差級(jí)離心。通常兩個(gè)組分的沉降系數(shù)差在10倍以上時(shí)可以用此法分離。在差速離心中細(xì)胞器沉降的順序依次為:核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、之后為核蛋白體。

     差速離心是指低速與高速離心交替進(jìn)行,使各種沉降系數(shù)不同的顆粒先后沉淀下來,達(dá)到分離的目的。沉降系數(shù)差別在一個(gè)或幾個(gè)數(shù)量級(jí)的顆粒,可以用此法分離。樣品離心時(shí),在同一離心條件下,沉降速度不同,通過不斷增加相對(duì)離心力,使一個(gè)非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。操作過程中一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開,然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心,分離出第二部分沉淀,如此往復(fù)加高轉(zhuǎn)速,逐級(jí)分離出所需要的物質(zhì)。差速離心方法較簡單,但分辨率不高,沉淀系數(shù)在同一個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)的各種粒子不容易分開,常用于其他分離手段之前的粗制品提取。

    在差速離心中細(xì)胞器沉降的順序依次為:核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、之后為核蛋白體。由于各種細(xì)胞器在大小和密度上相互重疊,而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉淀塊中,一般重復(fù)23次效果會(huì)好一些。差速離心只用于分離大小懸殊的細(xì)胞,更多用于分離細(xì)胞器。通過差速離心可將細(xì)胞器初步分離,常需進(jìn)一步通過密度梯離心再行分離純化。

差速離心 - 優(yōu)點(diǎn)

    差速離心法的優(yōu)點(diǎn)是樣品的處理量較大,可用于大量樣品的初分離。其缺點(diǎn)是分離復(fù)雜樣品和要求分離純度較高時(shí),離心次數(shù)多,操作繁雜。由于沉淀的多次清洗、溶解、再沉淀,容易引起中間損失,所以離心分辨力差。實(shí)際分離時(shí)由于離心時(shí)的對(duì)流、擴(kuò)散和收取沉淀時(shí)的污染,對(duì)于一些沉降系數(shù)相差不大的組分無法進(jìn)行*的分離提純。產(chǎn)品的純度和回收率都達(dá)不到上述理論值。因此差速離心法主要用于大量樣品的初步分離提純。

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