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DNA抽提標準化操作規程
點擊次數：1028 發布時間：2016-1-14
1 目的：DNA抽提標準化操作規范適用于HLA試驗中的DNA抽提操作。
2 適用范圍：DNA抽提實驗室
3 依據： DNA抽提標準化操作規范
4 引用文件：德國BAG公司（以下簡稱BAG） 《Instructions for use EXTRA-GENE I》
5 程序
5.1試劑準備
5.1.1 BAG® EXTRA-genE I
該試劑盒包括3部分：Solution 1 、Solution 2、Solution 3
使用前，若Solution 2有沉淀請將其在37℃孵育，直至沉淀*溶解
5.1.2 乙醇溶液，濃度（V/V）為96%或100％
5.1.3 乙醇溶液，濃度（V/V）為70%
5.1.4 滅菌蒸餾水，按照滅菌蒸餾水配制標準操作規范
5.2儀器及用具準備
5.2.1 移液器，規格：20µl – 200µl、200µl – 1000µl
5.2.2 移液器配套吸頭，規格：200µl和1000µl，滅菌、無DNA/RNA殘留
5.2.3 Eppendorf離心管，規格：1.5mL 或2.0 mL ，滅菌
5.2.4 混勻器
5.2.5 離心機（至少13，000 rpm，）
5.2.6 水浴箱
5.2.7 DNA濃度測定儀（DNA單位為ng/µl，可提供A260/280）
5.2.8 試管架（每排24孔）
5.2.9 手套規格：乳膠手套，與操作者手形相適應，經滅菌
5.3操作步驟：
5.3.1 換工作服、戴手套
5.3.1.1 從工作服衣柜中換取工作服，戴上適應自己手形的乳膠手套。
5.3.2 血樣檢查
5.3.2.1 血樣應在-20℃保存，保存時間不應超過1年，無溶血、血樣保存容器無破裂、無滲漏、容器蓋子無松動等現象。
5.3.2.2 核對血樣記錄與捐獻者記錄，確定血樣是否有效，只有有效捐獻者記錄的血樣才能用于試驗。
5.3.2.3 血樣量至少1 mL。
5.3.2.4 選取滿足以上要求的24個血樣作為一組抽提標本。
5.3.2.5 若血樣本是凍存的，請將血樣在室溫下孵育至其*解凍。
5.3.3 DNA抽提
5.3.3.1 將選取的24個血樣按照編號的順序依次放置在試管架上，每排12個，共2排。在記錄本上按順序記錄樣品號、抽提日期、抽提者等。
5.3.3.2 取24個1.5mLEppendorf離心管，依次放置在試管架上，每排12個，共2排，與血樣一一對應，并在離心管上用油性記號筆標上對應血樣的號碼。