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技術文章
PCR技術的原理與方法
點擊次數：1311 發布時間：2015-10-12
PCR定義
PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。是一項DNA體外合成放大技術，能快速特異地在體外擴增任何目的DNA。可用于基因分離克隆，序列分析，基因表達調控，基因多態性研究等許多方面。
PCR技術的基本原理
一.pcr反應成分：
1.模板DNA；2.引物；3.四種脫氧核糖核苷酸；
4.dna聚合酶；5.反應緩沖液、Mg2+等。
二.PCR反應基本步驟：
1.變性：高溫使雙鏈DNA解離形成單鏈（94℃，30s）。
2.退火：低溫下，引物與模板DNA互補區結合（55℃，30s）。
3.延伸：中溫延伸。DNA聚合酶催化以引物為起始點的DNA鏈延伸反應（70～72℃，30～60s）
PCR技術的原理與方法
1.變性(denaturation)：通過加熱使模板DNA的雙鏈之間的氫鍵斷裂，雙鏈分開而成單鏈的過程。
2.退火(annealling)：當溫度降低時，引物與模板DNA中互補區域結合成雜交分子。
3.延伸(extension)：在DNA聚合酶、dNTPs、 Mg2+存在下，DNA聚合酶催化引物按5’→3’方向延伸，合成出與模板DNA鏈互補的DNA子鏈。
以上述三個步驟為一個循環，每一循環的產物均可作為下一個循環的模板，經過n次循環后，目的DNA以2n的形式增加。
PCR技術的原理與方法
PCR技術的原理與方法