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革蘭氏染色法（原理、方法和意義）
點擊次數：992 發布時間：2014-11-27
革蘭氏染色法
是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭（Hans Christian Gram，1853年－1938年）于1884年所發明，zui初是用來鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關系。
未經染色之細菌，由于其與周圍環境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察陽性紫色陰性紅色。染色后細菌與環境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特征，而用以分類鑒定。
實驗原理
通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，，因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
致病菌
如：金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌等 屬革蘭氏染色陽性菌。
百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等 屬革蘭氏陰性。
所以根據細菌的革蘭氏染色性質，可以縮小鑒定范圍，有利于進一步分離鑒定，以對疾病做出診斷。又由于各種抗生素的抗菌譜不同，革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考。
實驗方法
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：
1）涂片固定。
2）草酸銨結晶紫染1分鐘。
3）自來水沖洗。
4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。
5）水洗，用吸水紙吸去水分。
6）加95%酒精數滴，并輕輕搖動進行脫色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃紅梁色液（稀）染2分鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。
染色結果
革蘭氏正反應菌體都呈紫色，負反應菌體都呈紅色。
臨床意義
其重要的臨床意義在于：
1、鑒別細菌
2、選擇藥物
3、與致病性有關：革蘭氏陽性菌能產生外毒素，革蘭氏陰性菌能產生內毒素，兩者的致病作用不同。