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技術文章
培養細胞活力測定
點擊次數:1048 發布時間:2014-11-20
培養細胞活力測定是腫瘤體外研究中應用zui廣的技術手段之一。
任何培養瓶內生長的細胞都由死細胞和活細胞組成,從形態上區別死、活細胞是困難的。
方法:四唑鹽(MTT)比色法
四唑鹽(MTT)商品名為噻唑藍
四唑鹽比色法的原理:活細胞中脫氫酶能將四唑鹽還原成不溶干水的藍紫色產物(formazan),并沉淀在細胞中,而死細胞沒有這種功能。二甲亞砜(DMSO)能溶解沉積在細胞中藍紫色結晶物,溶液顏色深淺與所含的formazan(甲月替)量成正比。再用酶標儀測定OD值。
MTT法簡單快速、準確,廣泛應用于新藥篩選、細胞毒牲試驗、腫瘤放射敏感性實驗等。
操作步驟
(1)100μL單細胞懸液接種于96孔板(5×104)。37℃、5%CO2培養箱中培養一段時間(根據實驗目的決定培養時間)
(2)加入2mg/ml的MTT液(50μL/孔);繼續培養3小時。
(3)吸出孔內培養液后,加入DMSO液(150μL/孔),將培養板置于微孔板扳蕩器上振蕩10分鐘,使結晶物溶解。
(4)酶標儀檢測各孔OD值(檢測波長570納米)。記錄結果,繪制。