QQ交談
您所在位置：請輸入產品關鍵字：
郵編：200431
聯系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發送留言
個性化：www.shifengsj.com
網址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://www.js967.com/st236594/
如何進行細胞電融合實驗
點擊次數：959 發布時間：2014-8-14
目的要求
使學生在了解電融合原理的基礎上，學會掌握各種細胞懸液的制備及電融合過程的操作方法。
實驗原理
游離的動物細胞或原生質體，置于電融合室中，在高頻交流電場的作用下，細胞被極化，成為偶極子，造成細胞之間相互連接，如果施加的高頻交流電壓（既正弦波的P-P值）過高或作用時間過長，則細胞連接成串珠狀，應適當控制以上條件，盡量是兩細胞處于點接觸狀態；然后施加方波脈沖予以刺激，由于電脈沖的瞬間作用，可擊破兩細胞接觸點部位的質膜，此時質膜脂類分子發生重組，同時由于細胞表面的張力作用，使兩細胞融合逐步完成。
實驗用品
器材：JCF-1型細胞電融合儀、細胞融合池、普通離心機、倒置顯微鏡（或研究用顯微鏡）刻度離心管、刻度吸管、小燒杯（10ml）等。
試劑：甘露醇、蔗糖、氯化鈉等。
材料：雞血。
實驗方法
一、動物細胞的制備
用滅菌的注射器先吸入Alsver液(葡萄糖2.05g，枸櫞酸鈉0.8g，NaCl 0.42g，加重蒸水100ml) 1ml，再從雞的翼下靜脈取血0.5～1ml，取出后放入刻度離心管中，再加入2~3ml Alsver液，使總量為4~5ml，混勻并封口，置于4℃冰箱內可供一周內使用。
二、細胞電融合
(1) 連接電源線插頭至電源線插座。
(2) 插入融合小室電極至電源線插座，將含有一定密度的動物細胞融合液加入融合小室內，將融合小室板放置倒置顯微鏡下，調正光距至細胞清晰。
(3) 按下電源開關。
(4) 用粗、中、細調調節成串脈沖所需頻率300~400KHz，然后調節所需成串脈沖電壓30~40V。
(5) 調節融合脈沖脈寬，調節融合脈沖所需個數，選擇好閘門時間(一般為“中”)
(6) 調節融合脈沖電壓至120~300V。
(7) 同時按下成串脈沖及融合脈沖開關，此時在倒置顯微鏡中可觀察到細胞移動并排列成串狀。
按下脈沖觸發開關，可觀察到細胞被電脈沖擊穿，并與相鄰的細胞發生融合。此時實驗完成。取下融合小室，關閉電源。