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士鋒生物免疫熒光樣品制備與觀察
點擊次數：903 發布時間：2014-8-4
一、原理
（一）什么是熒光，簡單地講，當用一定波長的光（如紫外光）照射某種物質時，經過照射的物質在極短時間內即可發射出一種可見的光，這種光即為熒光。
在生物中，由于產生熒光的方式不同，可以概括地歸納為以下幾種：
1．自發熒光：在生物的某些組織中，經紫外線照射后能直接發射出熒光的稱為自發熒光（或直接熒光）。如植物組織中的葉綠素，經紫外線照射后，即可發出紅色熒光。
2．次生熒光：有些生物組織經紫外線照射后，并不能發出熒光，但是當它吸收熒光染料后也可以產生熒光，這種稱為次生熒光（或間接熒光）。如吖啶橙，DAPI均可檢測細胞內的核酸。
3．免疫熒光：這種染色法是利用抗原與抗體反應的原理，將熒光染料與抗體結合，然后，將這種標記熒光染料的抗體再與相應抗原結合，即形成抗原、抗體復合物。經一定波長的光激發后，即可發射出熒光，以此辨認抗原在組織細胞內的分布狀況。這種方法被稱為免疫熒光（或熒光抗體法）。
組織和細胞中所產生的熒光，須借助熒光顯微鏡方可進行觀察，本實驗是用普通顯微鏡配以一種輕便的熒光光源觀察熒光現象。
免疫熒光樣品制備與觀察（二）輕便落射光裝置
落射光裝置的組成：此裝置是為普通顯微鏡配套設計的。它是由兩部分組成，一為光源；另一為落射光系統，如圖，落射光系統由激發濾片組成。當光線通過激發濾片到達二向分光鏡時，使激發光反射，經物鏡后，激發標本，標本輻射熒光，又通過物鏡，分光鏡而到達目鏡，以供觀察者觀察及記錄。
二、目的與要求
初步了解生物熒光及熒光染色法，學習幾種生物熒光標本的制作與觀察。
三、實驗內容
（一）生物自發熒光的觀察
（二）生物的熒光染色法
（三）熒光抗體法
四、實驗步驟
（一）生物自發熒光的觀察
1. 制片
（1）取一干凈載玻片
（2）用吸管吸取眼蟲培養物，滴于載玻片的中央位置。
（3）用鑷子取一張蓋玻片，沿液體的邊緣輕輕的蓋上蓋玻片。