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DNS（二硝基水楊酸）比色法還原糖含量測定實驗
點擊次數：1862 發布時間：2014-7-11
還原糖的測定實驗是生化技術中基礎實驗，是生化課程中必須掌握的實驗操作技術，不明白還原糖的測定原理、測定方法？本文羅列了DNS還原糖含量測定實驗原理、步驟、DNS試劑的制備、葡萄糖標準曲線的繪制、樣品的測定。
一、實驗目的、
DNS(二硝基水楊酸)比色法還原糖含量測定實驗實驗目的學習和了解還原糖和總糖測定的基本原理、比色法測定還原糖的操作步驟和分光光度計的使用方法。
二、實驗原理
還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。
還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類。單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，例如乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用各種糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來。對非還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成還原性單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量(常以葡萄糖含量計)。
還原糖在堿性條件下加熱可被氧化成糖酸及其它產物，而氧化劑3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內，還原糖的量與棕紅色物質顏色的深淺成正比關系，利用分光光度計在540nm波長下測定光密度值，查對標準曲線并計算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水，所以在計算多糖含量時應乘以系數0.9。
三、DNS試劑的制備
將6.3克DNS和262ml 2mol/L氫氧化鈉，加到500ml含有182克酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水楊酸試劑，貯于棕色瓶中備用。
四、葡萄糖標準曲線的繪制
分別取葡萄糖標準液(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于25 ml試管中，分別準確加入DNS試劑2ml，沸水浴加熱2min，流水冷卻，用水補足到15ml刻度。在540nm波長下測定吸光度。
五、樣品的測定
樣品液適當稀釋，使糖濃度為0.1-1.0mg/ml，取稀釋后的糖液1.0ml于15ml刻度試管中，加DNS試劑2.0ml，沸水煮沸2min，冷卻后用水補足到15ml刻度，在540nm波長下測定吸光度。從標準曲線查出葡萄糖mg/ml數。求出樣品中糖含量。
為生化實驗報告發愁的同學，不妨看看這篇文章，希望對大家有用。其實zui主要的是要熟知DNS還原糖含量測定原理，至于實驗試劑配制、操作步驟，這些都大同小異，機械式的操作。只有掌握了原理才能明白為什么要這樣做，操作中必須注意的事項。