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士鋒生物天然產物中多糖的分離、純化與鑒定
點擊次數：914 發布時間：2014-5-5
多糖類物質是除蛋白質和核酸之外的又一類重要的生物大分子。早在60年代，人們就發現多糖復雜的生物活性和功能。它可以調節免疫功能，促進蛋白質和核酸的生物合成，調節細胞的生長，提高生物體的免疫力，具有抗腫瘤、抗瘍和抗愛滋病(AIDS)等功效。
由于高等真菌多糖主要是細胞壁多糖，多糖組分主要存在于其形成的小纖維網狀結構交織的基質中，利用多糖溶于水而不溶于醇等有機溶劑的特點，通常采用熱水浸提后用酒精沉淀的方法，對多糖進行提取。影響多糖提取率的因素很多，如：浸提溫度、時間、加水量以及脫除雜質的方法等都會影響多糖的得率。
多糖的純化，就是將存在于粗多糖中的雜質去除而獲得單一的多糖組分。一般是先脫除非多糖組分，再對多糖組分進行分級。常用的去除多糖中蛋白質的方法有：Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，這些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白質沉淀，其中Sevag方法脫蛋白效果較好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4：1比例混合，加到樣品中振搖，使樣品中的蛋白質變性成不溶狀態，用離心法除去。
本實驗采用Sevag法(氯仿：正丁醇＝4：1混合搖勻)進行脫蛋白，用DEAE Sepharose層析柱進行純化，然后合并多糖高峰部分，濃縮后透析，凍干，得多糖級分。
試劑和器材
一、試劑
平衡緩沖溶液：0.01mol/L Tris-HCL, PH=7.2。
洗脫液：A: 0.1mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2; B: 0.5mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2。
氯仿、正丁醇、乙醇(95％)等，均為分析純。
二、材料
灰樹花子實體。
三、
器材
DEAE Sepharose Fast Flow，旋轉真空蒸發儀，搖床，離心機，層析柱：26×10。
操作方法
一、粗多糖的提取
將多糖子實體切碎烘干后稱量，采用熱水浸提法，每次原料和水之比均為1：5，浸提溫度為70℃－80℃，浸提時間3－5h，共提取4次，合并4次浸提液。真空旋轉蒸發濃縮，濃縮一倍體積。對多糖提取液需進行脫色處理，即以1％的比例加入活性炭，攪拌均勻15min后過濾即可。在濃縮液中加入3倍體積的乙醇攪拌，沉淀為多糖和蛋白質的混合物，此為粗多糖。 它只是一種多糖的混合物，其中可能存在中性多糖、酸性多糖、單糖、低聚糖、蛋白質和無機鹽，必須進一步分離純化。