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士鋒生物丙烯酰胺凝膠電泳實驗
點擊次數：862 發布時間：2014-4-10
聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的電泳方法。在這種支持介質上可根據被分離物質分子大小和分子電荷多少來分離。
聚丙烯酰胺凝膠有以下優點：
①聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N，N"甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝膠有 格子是帶有酰胺側鏈的碳-碳聚合物，沒有或很少帶有離子的側基，因而電滲作用比較小，不易和樣品相互作用。
②由于聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成的物質，在聚合前可調節單體的濃度比，形成 不同程度交鏈結構，其空隙度可在一個較廣的范圍內變化，可以根據要分離物質分子 的大小，選擇合適的凝膠成分，使之既有適宜的空隙度，又有比較好的機械性質。一 般說來，含丙烯酰胺7-7.5%的凝膠，機械性能適用于分離分子量范圍不1萬至100萬物 質，1萬以下的蛋白質則采用含丙烯酰胺15-30%的凝膠，而分子量特別大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝膠，大孔膠易碎，小孔膠則難從管中取出，因此當丙烯酰胺的濃度增 加時可以減少雙含丙烯酰胺，以改進凝膠的機械性能。
③在一定濃度范圍聚丙烯酰胺對熱穩定。凝膠無色透明，易觀察，可用檢測儀直接測定。
④丙烯酰胺是比較純的化合物，可以精制，減少污染。合成聚丙烯酰胺凝膠的原料是丙烯酰胺和甲撐雙丙烯酰胺。丙烯酰胺稱單體，甲撐雙 丙烯酰胺稱交聯劑，在水溶液中，單體和交聯劑通過自由基引發的聚合反應形成凝 膠。
在聚丙烯酰胺凝膠形成的反應過程中，需要有催化劑參加，催化劑包括引發劑和 另速劑兩部分。引發劑在凝膠形成中提供始自由基，通過自由基的傳遞，使丙烯酰胺 成為自由基，發動聚合反應，加速劑則可加快引發劑放自由基的速度。常用的引發劑 和加速劑的配伍如下表：
聚合反應催化劑配伍
引 發 劑
加 速 劑
（NH4)2S2O8
TEMED
(NH4)2S2O8
DMAPN
核 黃 素
TEMED
注：(NH4)2S2O8，過硫酸胺 TEMED：N，N，N，N";四甲基乙二胺 DMAPN：β－二甲基胺基丙晴
用過硫酸銨引發的反應稱化學聚合反應；用核黃素引發，需要強光照射反應液， 稱光聚合反應。 聚丙烯酰胺聚合反應可受下列因素影響：
1、大氣中氧能淬滅自由基，使聚合反應終止，所以在聚合過程中要使反應液與空氣 隔絕。
2、某些材料如有機玻璃，能抑制聚合反應。
3、某些化學藥物可以減慢反應速度，如赤血鹽。
4、溫度高聚合快，溫度低聚合慢。