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士鋒生物蘇云金桿菌的部分生化試驗鑒定
點擊次數：1322 發布時間：2014-3-20
一、目的要求：
應用生物化學技術對昆蟲病原細菌進行鑒定，乃是一種十分簡便快速的方法，鑒定蘇云金桿菌的生化指標是：V、P反應，卵磷脂酶，蛋白水解，吐溫酶，水楊素，七葉靈、蔗糖、甘露糖、表膜、酶、淀粉、幾丁質酶、精氨酸脫羥酶等。本實驗是通過簡單的生化測定來了解蘇云金桿菌的生化鑒定技術。
二、實驗材料：
1、 天平 2、電爐 3、藥勺4、量筒5、燒杯6、pH試紙7、高壓鍋（手提式）8、接種環
三、實驗內容：
1、各種糖、 糖 利用：
蛋白胨 1%
瓊脂 2%
蔗糖（甘露糖） 1%（水楊素為0.5%）
1%酸性復紅水溶液 0.5%
蛋白胨加熱溶于水中，加入酸性復紅水溶液。分別加入一種糖加熱溶解，以不加糖的蛋白胨作對照。分裝試管，調pH至7.58磅滅菌30分鐘。
接種后于30℃恒溫培養檢查產酸情況，若培養基變紅者為正反應。
2、 七葉靈利用：
牛肉膏 1%
七葉靈 0.5%
瓊脂 2%
另配5%三氯化鐵水溶液單獨滅菌。培養基溶后，先將三氯化鐵每皿滴入2滴，后倒平板混勻。凝固后電接菌種，30 ℃培養3-5天。菌苔周圍出現深褐色區為陽性反應。
3、 淀粉水解試驗：
牛肉膏 5克 NaCl 5克 可熔性淀粉 5克 瓊脂 10克 蒸餾水 1000毫升
將試驗菌點種于平板上，徒長出菌落后，收Lugoc氏碘液傾注于平板表面，菌落四周有透明圈者為陽性放應。
4、V、P反應：
蛋白胨5克 葡萄糖5克 NaCl 5克 蒸餾水 1000毫升
分裝試管 8磅30分鐘滅菌
接菌后于37 ℃培養24小時，每管加入4%KOH溶液10-20滴，再加等量的5%的一萘酚乙醇水溶液后，用力振蕩。然后置37 ℃下保溫0.5小時。培養物出現紅色即為V、P正反應，并設未接種的試管為對照。
5、 卵磷脂酶試驗
蛋白胨1% 酵母膏 0.3% NaCl 0.5% 瓊脂 2% 卵黃2-3% pH 7-7.2
用75%酒精將新鮮雞蛋進行表面消毒，并用經火焰滅菌的鑷子將蛋兩端各打一個孔，傾去蛋清，然后用無菌5ml吸管取出卵黃，加至觸化后冷卻至50。C左右的培養基中，使卵黃含量為培養基總體積的2~3%。混勻后倒平板，點接菌種24小時后觀察，菌液邊緣出現混濁圈者表示卵鱗酯酶為陽性。
6．菌膜形成試驗：
肉湯試管接種，30。C靜止培養24小時后觀察菌膜形成情況及搖動后膜破粹情況。