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士鋒生物單克隆抗體技術(shù)原理
點(diǎn)擊次數(shù)：940 發(fā)布時(shí)間：2013-12-30
B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對(duì)這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細(xì)胞的這種能力和量是有限的，不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無(wú)限生長(zhǎng)的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的價(jià)、單一的特異性抗體。這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。
制備單克隆抗體的方法是用缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤細(xì)胞變異株與脾臟的B細(xì)胞融合。采用HAT選擇性培養(yǎng)基（培養(yǎng)基中加次黃嘌呤HyPoxanthine H，氨基喋呤Aminoopterin A及胸腺嘧啶核苷Thymidine T），在這種選擇性培養(yǎng)基中，由于變異的瘤細(xì)胞不具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，所以不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA。而只能利用谷酰胺與尿核苷酸單磷酸合成DNA，這一途徑又被氨基喋呤所阻斷，所以未融合的瘤細(xì)胞不可避免也要死亡。融合的雜交瘤細(xì)胞由于脾淋巴細(xì)胞具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶，可以通過(guò)次黃嘌呤合成DNA，克服氨基喋呤的阻斷，因此雜交瘤細(xì)胞大量繁殖而被篩選出來(lái)。B淋巴細(xì)胞在一般培養(yǎng)基中不能長(zhǎng)期生長(zhǎng)，一般于二周內(nèi)均死亡。
單克隆抗體與常規(guī)抗體相比有如下優(yōu)點(diǎn)：
①單一特異性，與一個(gè)抗原決定簇反應(yīng)；
② 可重復(fù)性，能夠提供*一樣的抗體制劑；
③一經(jīng)制出，可無(wú)*地供應(yīng)；
④生產(chǎn)單克隆抗體，不一定需要純的抗原；
⑤能查出混合物中存在的用常規(guī)方法查不出的少量成分。