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士鋒生物免疫組織化學(xué)技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：986 發(fā)布時(shí)間：2013-11-29
（一） 免疫組織化學(xué)技術(shù)的基本原理
免疫組織化學(xué)技術(shù)是用顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)技術(shù)。即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，制備特異性抗體，再用這種抗體（*抗體）作為抗原去免疫動(dòng)物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無(wú)色的，因此，還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來（常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒）。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分，在顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。組織或細(xì)胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)。
免疫學(xué)的基本原理決定了免疫組織化學(xué)技術(shù)具有高度特異性，因此，免疫組織化學(xué)技術(shù)從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。ABC法或SP法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，所以免疫組織化學(xué)技術(shù)又具有敏感性高的特點(diǎn)。免疫組織化學(xué)技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，對(duì)組織和細(xì)胞中抗原的準(zhǔn)確定位，使其可以同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中定位觀察，并進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究。
（二）免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用范圍
近年來，隨著抗原的提純和抗體標(biāo)記技術(shù)的改進(jìn)，特別是自70年代中期雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體技術(shù)的引入，使制備的抗體具有高度的特異性。簡(jiǎn)便而敏感的免疫酶標(biāo)技術(shù)能夠用于普通培養(yǎng)細(xì)胞（株）、常規(guī)福爾馬林固定石蠟包埋的組織切片、若干年前的存檔標(biāo)本等，從而使該技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床病理學(xué)、微生物學(xué)診斷中，日益顯示出巨大的實(shí)用價(jià)值。目前主要應(yīng)用在如下幾個(gè)方面：
1 確定細(xì)胞類型
通過特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)抗原成分，以確定細(xì)胞類型。如角蛋白是上皮性標(biāo)記，前列腺特異性抗原僅見于前列腺上皮，甲狀腺球蛋白抗體是甲狀腺濾泡型癌的敏感標(biāo)記，而降鈣素抗體是甲狀腺髓樣癌的*標(biāo)記。有些細(xì)胞（如表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞、黑色素細(xì)胞、淋巴結(jié)內(nèi)指突狀和樹突狀網(wǎng)織細(xì)胞）光鏡下不易辨認(rèn)，但免疫組化標(biāo)記（S-100蛋白等）能清楚顯示其形態(tài)。
2 辨認(rèn)細(xì)胞產(chǎn)物
利用某些細(xì)胞產(chǎn)物為抗原制備的抗體，可作為相應(yīng)產(chǎn)物的特殊標(biāo)記，如內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生的各種激素，大多數(shù)可用免疫組化技術(shù)標(biāo)記出來，據(jù)此可對(duì)內(nèi)分泌腫瘤作功能分類，檢測(cè)分泌異位激素的腫瘤等。
3 了解分化程度
大多數(shù)標(biāo)記物都有其特定的分布部位，如上皮細(xì)胞膜抗原（EMA）著色部位在細(xì)胞膜上，但差分化乳癌胞漿內(nèi)也可出現(xiàn)陽(yáng)性顆粒；角蛋白的含量也與分化程度有關(guān)，低分化或未分化癌含量較低、染色較弱。
4 鑒定病變性質(zhì)
通過標(biāo)記Ig輕鏈（κ、λ）可區(qū)分部分B細(xì)胞性淋巴瘤與B細(xì)胞反應(yīng)性增生，前者常表達(dá)單一的Ig輕鏈（κ+/λ+），后者常為多克隆Ig輕鏈（κ+、λ+）。而標(biāo)記bcl-2蛋白在區(qū)別濾泡型淋巴瘤和反應(yīng)性濾泡增生上有相當(dāng)?shù)囊饬x。在濾泡型淋巴瘤，90%以上腫瘤性濾泡細(xì)胞有bcl-2的高表達(dá)；而在濾泡反應(yīng)性增生時(shí)，濾泡反應(yīng)中心的細(xì)胞不表達(dá)bcl-2蛋白，而套細(xì)胞則表達(dá)。
5 發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶
某些癌的早期轉(zhuǎn)移有時(shí)與淋巴結(jié)內(nèi)竇性組織細(xì)胞增生不易區(qū)別。用常規(guī)病理組織學(xué)方法要在一個(gè)組織中認(rèn)出單個(gè)轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞或幾個(gè)細(xì)胞是不可能的，而采用免疫組化方法（如用上皮性標(biāo)志）則十分有助于微小（癌）轉(zhuǎn)移灶的發(fā)現(xiàn)。對(duì)轉(zhuǎn)移性腫瘤也可借助免疫組化標(biāo)志尋找原發(fā)瘤，如骨組織內(nèi)有前列腺特異性抗原陽(yáng)性細(xì)胞，提示前列腺癌轉(zhuǎn)移。
6 探討腫瘤起源或分化表型
一些來源不明的腫瘤長(zhǎng)期爭(zhēng)論不休，zui后通過免疫組化標(biāo)記取得共識(shí)。如顆粒性肌母細(xì)胞瘤，曾被認(rèn)為是肌源性的，但該腫瘤肌源性標(biāo)記陰性，而神經(jīng)性標(biāo)記陽(yáng)性，證明為神經(jīng)來源（可能來自神經(jīng)鞘細(xì)胞）。分化很差的腫瘤病理上常按細(xì)胞形態(tài)分為梭形細(xì)胞腫瘤、小圓細(xì)胞腫瘤等，通過多種標(biāo)記的聯(lián)合應(yīng)用，也可能確定其來源。
7 確定腫瘤分期
判斷腫瘤是原位還是浸潤(rùn)及有無(wú)血管、淋巴管侵襲與腫瘤分期密切相關(guān)。用常規(guī)病理方法判斷有時(shí)是十分困難的，但用免疫組化法可獲得明確結(jié)果。如采用層粘連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可清楚顯示基底膜的主要成分，一旦證實(shí)上皮性癌突破了基底膜，就不是原位癌，而是浸潤(rùn)癌了，其預(yù)后是不同的。用第八因子相關(guān)蛋白、荊豆凝集素等顯示血管和淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物則可清楚顯示腫瘤對(duì)血管或淋巴管的浸潤(rùn)。對(duì)許多腫瘤的良惡性鑒別及有無(wú)血管或淋巴管浸潤(rùn)，這是主要的鑒別依據(jù)，同時(shí)也有治療及預(yù)后意義。