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士鋒生物牛副結(jié)核ELISA實驗材料和步驟
點擊次數(shù)：918 發(fā)布時間：2013-11-15
（一）材料與試劑
1．副結(jié)核分枝桿菌親和層析抗原
2．草分枝桿菌吸收抗原
3．兔抗牛IgG酶標抗體
4．牛副結(jié)核病參考陽性血清
5．牛副結(jié)核病參考陰性血清
1～5項均由單位供應(yīng)。
6．器材 elisa板, 酶聯(lián)免疫吸附檢測儀、加樣器、洗瓶、恒溫箱等。
7．試劑及溶液配制同第五節(jié)豬瘟ELISA。
（二）操作方法
1．抗原包被 以抗原稀釋液將副結(jié)核親和層析抗原稀釋至50µg/ml,每孔包被0.1ml。部分對照孔以牛血清白蛋白（50µg/ml）包被。
2．血清處理 取待檢血清、參考陽性血清、參考陰性血清各0.10ml，加生理鹽水0.80ml，加草分枝桿菌吸收抗原0.10ml，混勻，37℃感作1h。取0.10ml，加血清稀釋液0.90ml（注意血清稀釋液中加牛血清白蛋白，不加犢牛血清）。混勻即可
3．正式試驗 按表12－4進行。每個樣品加2孔，以求OD平均值。
表12－4 ELISA試驗程序表（單位ml）
（三）結(jié)果判定
在對照組成立的前提下, 即參考陽性血清呈棕黃色,參考陰性血清及其它對照孔呈無色或淺黃色, 判定待測結(jié)果。
1．目測判定 與參考陽性血清孔顏色相當，即呈棕黃色，判為ELISA陽性（＋）。
2．酶標儀判定（490nm） 以底物溶液對照孔調(diào)零，校正參考陽性血清OD值為1.0（或相應(yīng)規(guī)定值），測定待檢孔。當OD≥0.50，判ELISA陽性（＋）；0.40≤OD≤0.49判ELISA可凝（±）；OD<0.40，判ELISA陰性（－）。