QQ交談
您所在位置：產品搜索
請輸入產品關鍵字：
聯系方式
地址：上海市寶山區錦樂路
郵編：200431
聯系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發送留言
個性化：www.shifengsj.com
網址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://www.js967.com/st236594/
郵編：200431
聯系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發送留言
個性化：www.shifengsj.com
網址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://www.js967.com/st236594/
技術文章
如何對轉染細胞不表達進行補救
點擊次數：1147 發布時間：2013-10-17
問：
zui近做細胞轉染，預篩選穩定克隆，載體為pEgfp-N1，pIERS
現在是平行做幾個基因，轉然后，只有空載體和一個基因可以看到綠色熒光，其余均沒有，這會是什么原因呢?怎么補救啊?
答：
需要考慮的問題有：
1.你的細胞和轉染的方法，是不是你的細胞本身就很難轉染，有些細胞用脂質體轉染率很低的。在求助時告知細胞和具體的轉染方法和試劑。
2.質粒的純度和質量：看你使用那種試劑盒提取的，我們的經驗是使用Qiagen比國產的一些試劑盒差別很大。
3.pEGFP-N1可用來表達融合蛋白，如果你插入的目的基因帶終止密碼子的話，這時候如果轉讓率很低的話沒有綠色熒光，只有空載有綠色熒光，但是在轉染293T時我們發現帶終止密碼子的載體還可以見到熒光，但比空載明顯弱許多，不像空載體一樣所有的細胞都帶GPF。所以，不知你克隆時目的基因是否帶有終止密碼，如果去掉終止密碼子也要注意是否發生移碼錯位。