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技術文章
如何用BCA（二辛可酸）進行法蛋白定量
點擊次數：1216 發布時間：2013-8-16
在蛋白質定量試驗中，zui常用的方法是BCA法蛋白定量。那么為什么我們要選擇用BCA法?因為BCA發蛋白定量具有很多優點，如1.實驗操作十分簡單方便;2.實驗耗時短，快速;3.試劑靈敏度高，實驗結果準確;4.所用的試劑穩定性好，而且經濟實用，抗干擾能力強等。
實驗原理：
BCA（bicinchoninic acid）法蛋白濃度定量：在堿性環境下蛋白質與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu1+（biuret reaction）。BCA與Cu1+結合形成穩定的紫藍色復合物，在562 nM處有高的光吸收值并與蛋白質濃度成正比，據此可測定蛋白質濃度。
實驗步驟：
1. 先將solutionA 搖晃混勻，根據樣品數量，按50體積solution A加1體積solutionB試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻。BCA工作液在24小時內穩定。
2.稀釋標準品：*溶解蛋白質標準品（5mg/mlBSA,-20℃保存）取10微升用PBS稀釋至100微升（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為 0.5mg/ml。
將稀釋后的標準品（0.5mg/ml）按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升分別加到96孔板的蛋白標準品孔中，加標準品稀釋液補足到20微升。
3.加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中，加標準品稀釋液不足道20ul。
即：將蛋白質樣品作適當稀釋（多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋。
4.在 各孔中加入200微升BCA工作液，這時使用加樣槍輕柔吹打，將其中液體混勻，這時請注意，盡量小一點力氣輕柔一點，不要弄出很多氣泡，這樣會影響讀數），然后再37℃室內放置30-60min。將液體冷卻至室溫，在酶標儀上測定A562nm，或540-590nm之間的波長的吸光值，zui后可根據標準曲線計算出蛋白質的濃度，為樣品蛋白質定量。