QQ交談
您所在位置：請輸入產品關鍵字：
郵編：200431
聯系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發送留言
個性化：www.shifengsj.com
網址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://www.js967.com/st236594/
細胞培養的方法介紹
點擊次數：1601 發布時間：2017-2-20
1、復蘇細胞
1）液氮中取出所要的細胞，37℃水浴鍋中快搖，勿讓水入蓋，同時將培養液放入37℃水浴鍋中溫育；
2）將細胞離心，同時進入超凈臺，無菌操作，將培養液瓶用衛生紙擦干，除菌后放入超凈臺，將蓋子打開，瓶子放在架子上，瓶口朝火焰，將吹打吸管滅菌后吸部分培養液進入培養皿；
3）離心完畢，將細胞凍存液傾倒掉，吸入約1ml培養液到凍存管中，反復吹打，懸起細胞，吸入皿中，吹打，標好；
4) 顯微鏡下觀察，呈圓形，不結塊，不聚在一起，濃度適宜并且均勻，放入培養箱中培養。
2、傳代：
1）倒掉培養液，加含5%胰酶的培養液（T/E），37度或室溫消化10-15min，顯微鏡下觀察細胞是否脫落，脫落*后吸入無菌離心管；
2）離心，加適量培養液重懸分裝到培養皿中；
3）顯微鏡下觀察后放入培養箱中培養；
3、轉染細胞：
1）計算所要轉染的質粒量和lipofectamin量，如60mm CHO-1K，10μg 質粒/well加20μl LF2000；
2）37℃水浴鍋中溫育培養液，500μl Opti-MEM 加質粒 溫育5min，同時500μl Opti-MEM 加 LF2000 溫育小于5min；
3）將上述兩份混合在一起形成Mix，室溫溫育20min；
4）溫育同時，用無血清培養基（D/F）洗2-3次，晃幾晃；
5）在所要轉染的細胞中加入1-2ml D/F，再將溫育完畢的Mix加入細胞中，晃均勻，顯微鏡下觀察后放入培養箱中培養；
6) 培養6-8小時后觀察，細胞如果一切正常的話，換含血清的培養基，換液時要洗2-3次，換液后繼續培養24-36小時。
配方：
IMDM培養液（購自GIBCO公司)，含10%胎牛血清(FBS)、1%非必需氨基酸、1μM 二氫睪酮（DHT）（培養附睪上皮細胞需要加，COS7不用）（以上均購自PAA公司）；
T/E：培養基中含有：5%胰蛋白酶，0.53M EDTA ）