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激活素A(ACVA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

閱讀:139          發布時間:2019-12-27
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石蠟包埋組織切片免疫染色

激活素A(ACVA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)實驗步驟(建議方案 ): 

石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度 

1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr; 

2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次

10 min; 

3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%

乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min; 

4.抗原修復: 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫

度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×

2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,

直接進入第 5 步封閉。 

5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min; 

6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜; 

7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min); 

8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min; 

9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育

30 min; 

10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min); 

11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min; 

12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37

℃濕盒中孵育 30 min; 

13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min); 

14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色; 

15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明; 

16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片; 

17.激活素A(ACVA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。 

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