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ELISA 操作及方法
閱讀：204 發布時間：2019-6-24ELISA 操作及方法
• ELISA 所需的對照樣品
• 夾心 ELISA 實驗方案
• ELISA 分析
• 計算和評估 ELISA 數據
• ELISA 疑難解答提示
選擇適合的方法來分析 ELISA 數據。
ELISA 實驗可根據獲得的數據類型被分為以下幾類：
• 定性 ELISA 只用于確定樣品中是否有抗原存在。檢測需要一個不包含抗原或包含無關對照抗原的空白對照孔。
• 半定量 ELISA 用于對樣品間的抗原水平進行相對比較。
• 定量 ELISA 用于計算樣品中的抗原含量。實驗中需要比較由樣品測定得到的數值和由已知濃度純化的抗原梯度稀釋液得到的標準曲線。這是常用的 ELISA 數據。
ELISA 標準曲線
標準或校正曲線是定量 ELISA 實驗的要素，它們可用于計算樣品中抗原的濃度。
標準曲線是通過繪制已知的參考抗原濃度與每一濃度(通常是450 nm處的光密度)的讀數之間的關系得出的。
大部分 ELISA 酶標儀將加入用于曲線擬合和數據分析的軟件。通過外推標準曲線的線性部分計算樣品中抗原的濃度。
圖 1：來自人 ICAM1 SimpleStep ELISA® 試劑盒 (ab174445) 的定量 ELISA 實驗標準曲線的例子。
曲線擬合軟件允許您使用不同的模型繪制您的數據。
• 線性圖的一個坐標軸表示抗原的濃度，另一個表示讀數。R2 值在此通常用于確定擬合，數值大于 0.99 表示擬合非常好。然而，線性圖往往會壓縮曲線下端上的數據點，導致計算結果不準。
• 半對數圖可以幫助抵消線性圖引起的下端壓縮。半對數圖使用濃度的對數與讀數的關系。這種方法通常會得到數據點分布更均勻的 s 形曲線。
• 對數/對數圖可以為低到中濃度范圍提供良好的線性。但范圍的則容易失去線性。
• 4 或 5 參數邏輯（4PL 或 5PL）曲線是更為復雜的方法，考慮了其他參數比如大值和小值，因此需要更復雜的計算。4PL 假設拐點周圍對稱，而 5PL 考慮了不對稱的情況，通常更適合免疫分析。
如果您的軟件允許，則 4-PL 和 5-PL 將適用于大部分 ELISA 校正標準曲線。如果您的軟件不允許，則的選擇是使用半對數或對數/對數圖。