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自動化的微流控芯片系統在單細胞中檢測MicroRNA的異質性
閱讀：256 發布時間：2013-10-12自動化的微流控芯片系統在單細胞中檢測MicroRNA的異質性
單細胞自動制備系統使用Life Technologies 開發的試劑和實驗方法（“Single-cell MicroRNA expression analysis”），對單細胞中的miRNA轉錄本進行目標特異性擴增（STA）。從將細胞懸液加至C1芯片到完成數據分析的整個流程，可以在不到24小時內完成。
單細胞懸液（200-1000個細胞）被加入C1 IFC芯片的細胞進樣孔。使用來自Single Cell-to-Ct™試劑盒（Life Technologies）的裂解和預擴增試劑，以及來自TaqMan® MicroRNA Reverse Transcription 試劑盒（Life Technologies）的逆轉錄試劑，進行逆轉錄（使用Megaplex™ RT pool）和預擴增（使用Megaplex™ PreAmp pool），以便可以檢測每個單細胞中多達380種miRNA的表達。C1 IFC捕獲單細胞，然后沖洗，裂解，在反應倉平行對每個單細胞的miRNA進行逆轉錄和預擴增。96個預擴增過的樣本然后被導出，使用Biomark HD系統在一塊96.96動態芯片運行，研究每個樣本中多達96種miRNA的表達。
對從iPS，NPC和成熟神經元（HN）獲得的數據進行非監督式聚類分析，可以清楚的將HN細胞從iPS和NPC細胞區分開，同時也揭示了每類細胞中存在的亞群。miR-9更頻繁且更高水平的在成熟神經元（HN）中表達。
對從iPS，NPC和成熟神經元（HN）獲得的數據進行非監督式聚類分析，可以清楚的將HN細胞從iPS和NPC細胞區分開，同時也揭示了每類細胞中存在的亞群。miR-9更頻繁且更高水平的在成熟神經元（HN）中表達。
C1 miRNA STA實驗方案使用了Life Technologies為miRNA優化過的試劑。特別的，Megaplex™ RT及PreAmp pool可以從C1 IFC上每個單細胞獲得多達380種不同miRNA的cDNA。使用Biomark系統，在96.96 GE動態芯片可以讀出表達類型。 對來自不同類型細胞的數據進行非監督式聚類分析及PCA分析，揭示了不同類型細胞之間、或者同一類型細胞中miRNA表達類型的差異