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技術文章

ELISA試劑盒屬固相免疫測定

閱讀:675          發布時間:2014-8-5

ELISA試劑盒屬固相免疫測定

    在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當。
    抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應總是需要一定時間的溫育。
   溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。ELISA試劑盒在建立ELISA方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時,產物的生成可達。為加速反應,可提高反應的溫度,有些ELISA試劑盒試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中夜,以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA試劑盒中一般不予采用。

使用注意事項

1、試劑變質的跡象發色試劑有任何顏色表明發色劑變質,應當棄之。0標準的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質。

2、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導致所有標準的OD值偏低。

3、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況,則會出現標準曲線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

4、每加一種試劑前需將其搖勻。

5、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長反應時間到30min。反之,則減短反應時間。

6、反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

7、不要使用過了有效日期的ELISA試劑盒;也不要使用過了有效期的ELISA試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的ELISA檢測試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

   操作時的室溫應嚴格限制在規定的范圍內,標準室溫溫度是指20-25℃,但具體ELISA試劑盒操作時可根據說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,ELISA試劑盒板只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板同時測定。

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