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技術文章

ELISA試劑盒曲線問題解析

閱讀:157          發布時間:2025-2-25

   ELISA試劑盒試驗標準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結果,甚至是關系到實驗的成敗。下面將影響ELISA試劑盒曲線問題的原因做了總結:

OD值不正常的可能原因是:

     1、試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃;

     2、溫度控制不好,控制正確溫度;

     3、孵育時間不準確,控制孵育時間;

     4、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增 加,洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干;

     5、陽光直射,對著風直接吹,避風避光;

     6、酶標儀的波長錯誤,酶標儀的波長450nm

     7、抗體的稀釋錯誤,正確的稀釋抗體;

     8、水質問題,用娃哈哈礦泉水代替。

 

白板的可能原因是:

    1、洗滌液配制錯誤,正確的配制洗滌液;

    2、少加液體(錯加液體),正確的步驟加液體。

 

無梯度可能原因是:

   1、標準品也污染,換標準品點板;

   2OD值不正常,控制溫度時間在做一次;

   3、人為點板,不要點板。

 

線性不好可能原因是:

OD值不正常,控制溫度時間在做一次。

 

做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意

1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結果無從談起。

2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內,包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內。

3、最好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。

4、檢測標準樣品時,應按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。

5、標準曲線的樣品數一般為7個點,但至少要保證有5個點。

6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動,但一般來說,相關系數R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999


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