紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜，來(lái)研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計(jì)可以在紫外可見(jiàn)光區(qū)任意選擇不同波長(zhǎng)的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)室選擇時(shí)需要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的需要和目的用途來(lái)考慮，光學(xué)構(gòu)造和光源、探測(cè)方法、樣品類(lèi)型和數(shù)據(jù)處理等都是要考慮的因素。
光源和檢測(cè)方法
分光光度計(jì)的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素。實(shí)驗(yàn)室研究人員希望省錢(qián)購(gòu)入專(zhuān)門(mén)儀器定量核酸、蛋白或者細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。
一些儀器具有多種光源供選擇：紫外光、可見(jiàn)光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見(jiàn)光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見(jiàn)光區(qū)域。
分光光度計(jì)的帶寬很大程度上依賴(lài)于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實(shí)驗(yàn)精確要求的譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對(duì)復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測(cè)量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺(tái)分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。
光學(xué)構(gòu)造
一般來(lái)說(shuō)，紫外光分光光度計(jì)分為單光束和雙光束兩類(lèi)。顧名思義，單光束型主要是依賴(lài)單束光進(jìn)行測(cè)量。一束給定波長(zhǎng)的光通過(guò)對(duì)照物，然后再通過(guò)實(shí)際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果。
雙光束型則是通過(guò)一個(gè)斬光輪將一束光分成兩束，分別測(cè)量對(duì)照樣品和實(shí)際樣品。可以最小化光漂移和減少測(cè)量時(shí)間。一些雙光型光度計(jì)不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來(lái)代替，將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測(cè)量對(duì)照樣品和目的樣品。因?yàn)樵黾恿藴y(cè)量的速度，所以雙光束分光光度計(jì)在測(cè)量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。
樣品類(lèi)型
在大部分的樣品類(lèi)型中，分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室需求。但盡管對(duì)于小實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來(lái)滿足通量的要求和減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來(lái)滿足各種改變需要。體現(xiàn)了柔韌性。
數(shù)據(jù)管理
大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動(dòng)儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器，通常與PC機(jī)一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件。同時(shí)用戶也可以選擇升級(jí)軟件以滿足他們的需要。
另外一個(gè)值得考慮的因素是數(shù)據(jù)的最終使用。各獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室都有各自感興趣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。例如一些藥物機(jī)構(gòu)需要考慮美國(guó)FDA的要求和歐聯(lián)盟的藥物評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)的要求選擇不同的數(shù)據(jù)處理方式。
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