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上海寶葉生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員·6年您現(xiàn)在的位置： 首頁(yè)> 公司動(dòng)態(tài)> 瓊脂糖膠體電泳 （agarose gel electrophoresis）
- 聯(lián)系人：
- 蔣先生
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- 手機(jī)：
- 13391038817
- 地址：
- 上海市嘉定區(qū)新源路155弄
- 個(gè)性化：
- www.shjsbio.com
- 網(wǎng)址：
- www.shjsbio.com
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儀器用具：
迷你電泳槽及鑄膠器 （Mupid II）；UV transilluminator 及影像分析系統(tǒng)；防護(hù)面罩
藥品試劑：
瓊脂糖粉末 （agarose, low EEO）
1×TAE電泳緩沖液 （40 mM Tris-acetate, 1 mM EDTA, pH 8.0）：
由50×TAE （每1 L含242 g Tris base, 57.1 mL glacial acetic acid, 100 mL的0.5M EDTA-8.0） 稀釋使用。
10×追蹤染劑 （0.25% bromophenol blue, 0.25% xylene cyanol, 0.1 M EDTA, 50%glycerol）
Ethidium bromide （EtBr） stock solution：500 μg/mL，裝于滴瓶中，每50 mL膠體溶液加一滴 （zui終濃度為0.5 μg /mL）
DNA 標(biāo)準(zhǔn)分子量：
DNA/HindIII fragments：包含8 個(gè)片段23.1, 9.4, 6.5, 4.3, 2.3, 2.0, 0.56, 0.125kb ，濃度為0.5 μg/μL，以下簡(jiǎn)稱 λMr。
1 Kb DNA Ladder Fragments： 250 bp~10 kb共14 個(gè)DNA片段，濃度為0.5 μg/μL，以下簡(jiǎn)稱LadMr。
方法步驟：
1） 每組制備一片12-well 1.2% agarose gel： 秤取適量agarose 粉末，加入1×TAE（大片Mupid II 膠片約需40 mL），以微波爐加熱溶解后，置55℃水浴降溫。
◆ Ethidium bromide 為突變劑，以下操作請(qǐng)務(wù)必戴手套，并禁止戴著手套的手到處亂摸！
2） 加入EtBr （每50 mL 膠體溶液加一滴stock solution），混合均勻，將膠體溶液倒入鑄膠模，插上樣本梳。置室溫凝結(jié)后，小心拔開(kāi)樣本梳，將膠片置于電泳槽中，倒入1×TAE，直至溶液蓋過(guò)膠片。
3） 樣品DNA 及DNA 標(biāo)準(zhǔn)分子量各加入1/10 體積的10×追蹤染劑。將樣品及λMr 置65℃水浴5~10 min，移至冰浴降溫后，即可加入膠片的樣品槽。
◆ LadMr 請(qǐng)勿加熱！
4） 以50V 或100V 進(jìn)行電泳，待追蹤染劑bromophenol blue 行進(jìn)至膠體三分的二處時(shí)，關(guān)閉電源，取出膠片，以UV transilluminator box 觀察色帶位置，并照相記錄結(jié)果。
◆ 請(qǐng)務(wù)必戴防護(hù)面罩，以免受到UV 傷害。
5） 與標(biāo)準(zhǔn)分子量比較，估計(jì)各DNA 片段的分子量并建立質(zhì)體pBluescript 的限制圖譜。
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