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魚孕激素進口酶聯(lián)免疫試劑盒操作說明
閱讀：750 發(fā)布時間：2012-8-15魚孕激素/孕酮（PROG）酶聯(lián)免疫試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 50 pg/ml -1200 pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中孕激素/孕酮（PROG）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中魚孕激素/孕酮（PROG）水平。用純化的魚孕激
素/孕酮（PROG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入孕激素/
孕酮（PROG），再與HRP 標記的孕激素/孕酮（PROG）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗
體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在
酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的孕激素/孕酮（PROG）呈正相關(guān)。用
酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中魚孕激素/孕酮
（PROG）濃度。
酶聯(lián)免疫試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（2400 pg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
1200 pg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
600 pg/ml 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
300 pg/ml 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
150 pg/ml 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
75 pg/ml 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。