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技術文章

ELISA技術的操作要點

閱讀:1429          發布時間:2016-3-7

zui近,有幾位客戶我司ELISA技術的操作要點,我司特在此做出解答:

的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA 的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國內醫學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA 各個操作步驟的注意要點,珠式、管式及磁性球ELSIA,國外試劑均與特殊儀器配合應用,兩者均有詳細的使用說明,嚴格遵照規定操作,必能得出準確的結果。

其中zui重要的是標本的采取和保存:

可用作ELISA測定的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液),有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA 檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫學檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA 中血漿和血清可同等應用。

血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP 為標記的ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性 HRP,也會產生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其中的可發生聚合,在間接法 ELISA 中可使本底加深。
一般說來,在 5 天內測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。

如果您還有什么疑問或建議可以來電我司技術人員,謝謝!

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