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學(xué)習(xí)細(xì)菌的鞭毛染色法之鍍銀法染色
閱讀：4208 發(fā)布時(shí)間：2013-8-21實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)菌的鞭毛極細(xì)，直徑一般為10—20nm，只有用電子顯微鏡才能觀察到。但是，如采用特殊的染色法，則在普通光學(xué)顯微鏡下也能看到它。鞭毛染色方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染劑處理，讓它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進(jìn)行染色。常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配制而成。現(xiàn)推薦以下兩種染色法。實(shí)驗(yàn)方法
1.鍍銀法染色
（1）清洗玻片 選擇光滑無裂痕的玻片，選用新的。為了避免玻片相互重疊，應(yīng)將玻片插在金屬架上，然后將玻片置洗衣粉過濾液中（洗衣粉煮沸后用濾紙過濾，以除去粗顆粒），煮沸20min。取出稍冷后用自來水沖洗、晾干，再放入濃洗液中浸泡5—6天，使用前取出玻片，用自來水沖去殘酸，再用蒸餾水洗。將水瀝干后，放入95%乙醇中脫水。
（2）菌液的制備及制片：菌齡較老的細(xì)菌容易失落鞭毛，所以在染色前應(yīng)將待染細(xì)菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面上（培養(yǎng)基表面濕潤(rùn)，斜面基部含有冷凝水）連續(xù)移接3-5代，以增強(qiáng)細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)力。zui后一代菌種放恒溫箱中培養(yǎng)12—16h。然后，用接種環(huán)挑取斜面與冷凝水交接處的菌液數(shù)環(huán)，移至盛有1—2mL無菌水的試管中，使菌液呈輕度混濁。將該試管放在37℃恒溫箱中靜置10min（放置時(shí)間不宜太長(zhǎng)，否則鞭毛會(huì)脫落），讓幼齡菌的鞭毛松展開。然后，吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端，立即將玻片傾斜，使菌液緩慢地流向另一端，用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放空氣中自然干燥。
用于鞭毛染色的菌體也可用半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)。方法是將0.3-0.4%的瓊脂肉膏培養(yǎng)基熔化后倒入無菌平皿中，待凝固后在平板中央點(diǎn)接活化了3-4代的細(xì)菌，恒溫培養(yǎng)12-16h后，取擴(kuò)散菌落的邊緣制作涂片。
（3）染色
①滴加A液，染4—6min。
②用蒸餾水充分洗凈A液。
③用B液沖去殘水，再加B液于玻片上，在酒精燈火焰上加熱至冒氣，約維持0.5—1min（加熱時(shí)應(yīng)隨時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)掉的染料，不可使玻片出現(xiàn)干涸區(qū)）。
④用蒸餾水洗，自然干燥。
（4）鏡檢：先低倍，再高倍，zui后用油鏡檢查。
結(jié)果：菌體呈深褐色，鞭毛呈淺褐色。
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