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試劑盒用于酶標儀的檢測程序
閱讀：2077 發布時間：2012-12-6酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指于測讀ELISA結果吸光度的光度計。針對固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設計。許多試劑公司配套供應酶標儀。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度、讀數的準確性、重復性、度和可測范圍、線性等等。優良的酶標儀的讀數一般可到0.001，準確性為±1%，重復性達0.5%。舉例說，若某孔測得的A值為1.083，則該孔相對于空氣的真實A值應為1.083±0.01（1.073~1.093），重復測定數次，其A值均應1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同。普通的酶標儀在0.000~2.000，新型號的酶標儀上限拓寬達2.900，甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應注意可測范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測范圍，比如某一酶標儀的可測范圍為0.000~2.900，而其線性范圍僅0.000~2.000，這在定量ELISA中制作標準曲線時應予注意。 酶標儀不應安置在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在15~30℃，使用前先預熱儀器15-30分鐘，測讀結果更穩定。測讀A值時，要選用產物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀，即每孔先后測讀兩次，*次在zui適波長（W1），第二次在不敏感波長（W2），兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1，630nm為W2，zui終測得的A值為兩者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。各種酶標儀性能有所不同，使用中應詳細新聞記者說明書。
酶聯免疫試劑盒檢測程序
1. 建立標準曲線：設標準孔8孔，每孔中各加入樣品稀釋液100ul，*孔加標準品100ul，混勻后用加樣器吸出100ul，移至第二孔。如此反復作對倍稀釋至第六孔，zui后，從第六孔中吸出100ul棄去。第七孔為空白對照，第八孔為零孔。
2. 加樣：待測品孔每孔各加入待測樣品100ul混勻。
3. 將反應板充分混勻后粘上封板紙置37 oC 120分鐘。
4. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
5. 每孔（除零孔）加*抗體工作液50ul，置37℃ 60分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔（除零孔）加酶標抗體工作液100ul（兩滴），將反應板置37 oC 60分鐘。
8. 洗板：同前。
9. 每孔加入底物液A、B各一滴，置37 oC避光反應15分鐘。
10. 每孔加入1滴終止液混勻。
11. 在450nm處測吸光值。