化工儀器網(wǎng)
技術文章
恒遠生物|血清中出現(xiàn)沉淀物的原因及避免方法
閱讀：791 發(fā)布時間：2023-9-5 血清：指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞的起到某些保護作用。
用于細胞培養(yǎng)的胎牛血清以及其它血清中可能存在的沉淀物有以下三種:
1.纖維蛋白：它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達到1-2mm，肉眼可觀。因為血清都是在低溫下進行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體）在處理過程中仍然處于溶解狀態(tài)，當經(jīng)過過濾分裝后，就會在瓶中凝結出現(xiàn)纖維蛋白沉淀。
2.膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。
3.磷酸鈣：也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現(xiàn)渾濁的現(xiàn)象，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染。
影響：
1.血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，在血清生產(chǎn)后已經(jīng)經(jīng)過100nm或者40nm的過濾處理，并經(jīng)過嚴格的無菌檢測，因此不推薦再次過濾用于細胞培養(yǎng)的血清。可以在大規(guī)模的細胞培養(yǎng)中將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。
3、污染，磷酸鈣往往被誤認為是微生物污染，研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，就會去做無菌試驗，將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天，結果可能會觀察到更多的絮狀沉淀，因此就斷定血清被污染了。我們建議不要直接將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進行培養(yǎng)以觀察是否有細菌生長。另外，也可以進行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認是否有污染。
避免血清沉積發(fā)作的辦法：
a）凍結血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，削減沉積的發(fā)作。
b）血清分裝凍存時，須規(guī)矩搖晃均勻（當心勿形成氣泡），使溫度與成分均一。
c）勿直接由-20℃直接至37℃凍結，因溫度改變太大，簡單形成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)作沉積。
d）勿將血清置于37℃太久，不然血清會變得污濁，一起血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞，然后影響血清的質(zhì)量。
e）血清的熱滅活十分簡單形成沉積物的增多，若非必要，能夠無須做此過程。
f）若有必要做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的準則，而且隨時搖晃均勻，溫度過高，時刻過久或搖晃不均勻，都會形成沉積物的增多。