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ELISA實驗之細胞樣本的處理方法
閱讀：2437 發布時間：2021-3-17
細胞樣本根據目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養上清作為樣本。 需要注意的是： 因該類樣本干擾因素較多， 如細胞狀態、 細胞數量(大于 10^6)、ph(約為 7)、培養基鹽離子濃度、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。
如果目的物是分泌型，主要在胞外，即可選擇細胞培養上清作為樣本，如果目的物主要存在于胞內，則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型。細胞培養上清處理方法相對簡單，取細胞培養上清，1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測。
細胞裂解液：
1）貼壁細胞需要先用胰酶消化，離心收集細胞（懸浮細胞可直接離心收集） ；
2）將收集到的細胞用冷PBS 洗3次；
3）物理方法裂解細胞（可先超聲破碎細胞，再反復凍融） ：
⇒ 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂；
⇒ 反復凍融：將待破碎的細胞在-20 度以下冰凍，室溫融解，反復3次，使細胞溶脹破碎；
4）將標本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用。
一般情況下，物理方法如反復凍融，勻漿等方法會比化學方法好，因為化學方法會引入酸或堿，可能會對ELISA實驗產生影響。我們也做了相關實驗來評測化學提取液和洗滌劑對ELISA檢測的影響，如 RIPA、TritonX-100、NP-40和SDS、脫氧膽酸鈉、β巰基乙醇、DTT 和尿素。根據我們的質檢結果，高濃度的洗滌劑會影響ELISA檢測的終結果。然而，其效果會洗滌劑濃度的降低而減少。與其他化學裂解緩沖液相比，1％的 Triton X-100 和 1％NP-40 對 ELISA檢測的影響較小。如果一定要用化學提取方法的話，推薦用這兩種洗滌劑來提取靶蛋白。利用化學的細胞裂解液裂解細胞，如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應影響檢測效果，推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。
處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復凍融，樣本處理之后可分裝密封保存， 4 度保存應小于 1 周，-20 度不應超過 1 個月，-80度不應超過2個月。在標本使用前應緩慢均衡至室溫，不應加熱使之融解。樣本的處理是實驗成功的第yi步, ，以上就是關于常見樣本處理方法的一個簡述，供研究者參考。