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激情盛夏,ELISA法檢測AB含量的方法
閱讀：1780 發布時間：2018-7-23ELISA),先將ABA蛋白質復合物與固相載體(聚苯乙烯微量滴定板)結合,然后將待測的ABA(樣品或標準品)和兔抗ABA抗體加入微量滴定板的孔中,進行競爭反應,接著棄去上清液,洗滌固相表面,加入酶標二抗使其與結合在固相ABA上的抗體反應,后去除多余的未反應的酶標二抗,測定與固相結合的酶活性,酶活性和待測ABA含量呈負函數關系,即固相ABA結合的抗體與酶標二抗量(OD或B%)隨待測ABA含量增加而減少,以一系列已知濃度的ABA的OD值制圖而獲得標準競爭性抑制曲線,對于未知樣品B,只要在同樣條件下測定反應后的OD值,就可以從標準曲線上查到ABA的量。
測定方法 ELISA方法是一種固相抗原型酶聯免疫法(enzyme Linked Immuno Sorbent Assay
1.包被：在微量滴定板內準確加入100μLABA包被液，37℃濕盒過夜。
2.標樣稀釋?：取8支試管每管加150μLDB，管中加入50μL（2000ng/50μL）標準液，充分渦旋后，取50μL至第二號管中，同樣渦旋后，取50μL到第三管；依次稀釋到第六管，稀釋后的標準ABA依次為1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng/50μL。
3. 洗板：從37℃濕盒中取出滴定板，恢復到室溫后，棄去包被液，用WB（洗滌緩沖液）洗滌三次，甩干（吸水紙）。
4.加樣：1～8孔對應加入ABA標樣50μL，10號孔相應加入濃ABA標樣，9號孔加50μLDB，三排重復；然后每孔加50μL抗體，37℃ 45分鐘。
5.洗板：
6.加酶標二抗：每孔加100μL，37℃反應1小時。
7.洗板：
8.顯色：各孔加10μLOPD顯色液，37℃ 20分鐘。
9.終止反應：各孔加50μL 6NH2SO4。
10.讀數：490nm讀取OD值。其中10號孔調零,而9號孔為大值(B0),1~8號孔的OD值為B。
11.結果計算：以In（B/B0）∕（1－B/B0）為縱坐標，以標準ABA濃度的常用對數（lg［ABA］）為橫坐標,繪制曲線。
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