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ELISA實(shí)驗中血清標(biāo)本注意事項五要點(diǎn)

2016-7-13  閱讀(2975)

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 大部分elisa 檢測均以血清為標(biāo)本,那么在ELISA實(shí)驗過程中血清標(biāo)本有哪些注意事項呢?

 具體注意事項:
1、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
2、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
3、血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下。
4、冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
5、標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。

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