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北京瑞科中儀科技有限公司

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倒置顯微鏡應用

閱讀:989      發布時間:2011-10-3
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倒置顯微鏡應用
主要儀器與試劑①倒置顯微鏡(目鏡中帶有計數框)。②樣品沉淀器由沉降柱③血球計數器。④合哥氏溶液。
試驗方法
①樣品的采集及保存
水樣采集后用魯哥氏溶液保存,100 m1.水樣加1mL獸哥氏溶液并置于暗處。
②樣品沉淀
將沉降柱置于沉降板上,使沉降柱口與沉淀室口吻合,取1-20 mL水樣注入沉降柱(操作時不要形成旋渦),然后加蒸餾水至沉降柱口,用玻片將沉降柱口封好盡量避免有氣泡產生。將沉淀器靜置4 h使水樣沉淀,移動沉淀器時要注意避免沉淀物非隨機分布。
http://www.cnrico.com
奧林巴斯顯微鏡
③樣品檢測
用玻片推去沉降柱及其中的上清液并將玻片蓋于沉淀室上,注意沉淀室內不能有氣泡產生。將沉淀室放入顯微鏡載物臺,用目鏡中的計數框進行長條計數,統計經過方框內的藻類數量。隨機抽取沉淀室底板3-5條或對整個沉淀室進行計數,直到優勢種類的計數X100個/mL。
變異系數
在水樣體積及計數條帶相同的前提下,倒置顯微鏡計數法的變異系數比血球計數法小.樣品E的變異系數較大是由于其優勢種類為微囊藻,微囊藻具有偽空泡不易被沉淀,此外通常微囊藻群體中有大量的細胞個體,在計數時很容易產生誤差。而采用血球計數法是由于細胞密度大,且不易出現大的群體,故變異系數較小。
準確度
采用倒置顯微鏡計數法時對整個沉淀室((s咖3IIlIll)進行隨機抽樣,而血球計數法僅對1 nm3的樣品室進行抽樣,可見在選擇了恰當的水樣體積和計數條帶數后,倒置顯微鏡計數法可達到較高的準確度,而血球計數法只有當水樣中含有的浮游藻類密度非常高時才能得出統計學上可靠的數據。在檢測的5個樣品中,除E外,其他4個樣品采用倒置顯微鏡計數法檢出的平均藻類總數高于血球計數法的結果(由于E中微囊藻細胞密度過大及其種屬特性,在沉淀室中微囊藻細胞個體處于不同的層面,計數時很容易產生誤差)。
由此可見,倒置顯微鏡計數法可檢出樣品中的大多數種屬,能較為全面地反映樣品的種群分布情況,有利于對湖泊或水庫作進一步研究。而血球計數法僅能檢出水樣中占優勢的1-2個種群,一些常見的、數量較少的種屬則無法檢出。
采用倒置顯微鏡計數法檢測水中的浮游藻類,水樣量小、準確度高、變異系數小,能較為全面地反映樣品的種類分布情況,且操作簡單易行。檢測中應注意以下幾方面:移去上清液時沉淀室內不能有氣泡存在,以免影響計數結果;移動沉淀室時要避免傾斜,以免造成藻類在沉淀室底板非隨機分布;選取適當的水樣體積及計數條帶以獲得較高的準確度。

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