吸走多余培養基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養瓶潤洗細胞；
吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養皿使胰酶浸沒細胞表面，培養瓶放37度培養箱消化；
（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞*漂浮。混勻細胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
加入6-8ml*培養基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；
將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養基重懸37度培養箱繼續培養；

傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養基+8%DMSO（可以根據實驗室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。

Tips：

細胞經過運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞si亡破碎形成碎片，是正常現象。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養基重懸接種到新的培養瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養基重新接種或傳代。
細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養（gao不超過20%），也可以根據細胞生長狀態，選擇傳代細胞到新的培養瓶中繼續培養。