多酚氧化酶檢測試劑盒(PPO)說明書

可見分光光度法

貨號：YJS2203                                       規格：50管/24樣

產品簡介：

PPO主要存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質和組培等密切相關。

PPO能夠催化鄰苯二酚產生醌，后者在525nm有特征光吸收。

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

產品內容：

提取液：液體，60ml×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體，40ml×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體，10ml×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體，20ml×1瓶，4℃保存

操作步驟：

• 粗酶液提取：   

1、收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每200萬細菌或細胞加入400μl提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次）；8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

2、稱取約0.2g組織，加入1ml提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

二、測定操作表：

充分混勻，5000g，常溫離心10min，收集上清，用蒸餾水調零，525nm處檢測測定管和對照管吸光度。

注意:每個測定管需要設置一個對照管,可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行1min沸水浴處理

PPO活性計算：

1、血清、血漿或果汁PPO活性計算

單位定義：每分鐘每毫升樣品在每毫升反應體系中使525nm吸光值變化0.01為一個酶活力單位

PPO（U/mL）=（A測定-A對照）×反應總體積÷(V液*×V樣*÷V樣總*) ÷0.01÷反應時間

=80×（A測定-A對照）÷V液*

2、組織中PPO活力的計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每分鐘每mg組織蛋白在每毫升反應體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。

PPO（U/mg prot）=反應總體積（1200μl）÷樣本體積（150μl）÷反應時間（10min）÷0.01×（A測定-A對照）÷蛋白濃度（mg/ml）=80×（A測定-A對照）÷蛋白濃度（mg/ml）

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每分鐘每g組織蛋白在每毫升反應體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。

PPO（U/g 鮮重）=反應總體積（1200μl）÷樣本體積（150μl）÷反應時間（10min）÷0.01×（A測定-A對照）÷樣本鮮重（g/ml）=80×（A測定-A對照）÷樣本鮮重（g/ml）

3、按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每分鐘每1萬個細菌或細胞在每毫升反應體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。

PPO（U/10⁴ cell）=反應總體積（1200μl）÷樣本體積（150μl）÷反應時間（10min）÷0.01×（A測定-A對照）÷細菌或細胞密度（10⁴/ml）=80×（A測定-A對照）÷500*

*V液：加入的血清、血漿或果汁的體積

*V樣：加入樣本體積

*V樣總：加入提取液體積

*500：細菌或細胞總數500萬