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上海研謹生物科技有限公司
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大鼠外周血白細胞分離液試劑盒

時間:2016/6/12閱讀:2164
分享:

WBC1083大鼠外周血白細胞分離液試劑盒

 

 
大鼠外周血白細胞分離液說明書
(細胞培養及分子生物學)
【產品規格】
200ml/Kit
【產品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內容如下:

 

名稱

產品規格

編號

A

大鼠外周血白細胞分離液

 

200ml

B

樣本稀釋液(贈品)

2010C1119

200ml

C

清洗液(贈品)

2010X1118

200ml

D

紅細胞裂解液(贈品)

NH4CL2009

100ml

E

說明書

 

1份
 

【實驗前準備】
A.適用儀器
zui大離心力可達 1200g的水平轉子離心機
B.耗材

產品名稱

產品貨號

產地

15ml離心管散裝

339650

美國  NUNC

15ml離心管架裝

339651

美國  NUNC

50ml離心管散裝

339652

美國  NUNC

50ml離心管架裝

339653

美國  NUNC

無菌膠頭滴管或塑料滴管

 

 

【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2的條件下進行。
首先取抗凝血,根據樣本量大小,分以下兩種情況:
情況 A:血液樣本量小于 5ml時,實驗方法如下:
1.取一支15ml離心管,先加入  5ml分離液
2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心20-30min(注:如改
 變血液樣本及分離液用量,需相應調整離心力及離心時間,具體離心條件需客戶自行摸

索,以達到分離效果。)
3.離心后用吸管小心吸取所有環狀乳白色細胞層(一層或兩層),加入10 ml清洗液(產
品編號:2010X1118),混勻細胞。250g,離心 10min。重復洗滌 2-3次,即得所需白細
胞。
4.如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液(產品編號:NH4CL2009)裂解紅細胞,具體操
作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。
情況 B:血液樣本量大于等于 5ml 時,實驗方法如下:
1.取一支適當的離心管,先加入與樣本等量的分離液。
2.將血液樣本小心加于分離液之液面上, 450-650g(zui大離心力可至 1000g),離心
20-30min。(注:根據血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心
時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到分離效果。加入血液樣本后,樣
本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二)。
3.剩余步驟同“情況 A”中步驟 3與步驟  4。
【注意事項】
1.全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2的條件下進行。為獲得的實驗結果,zui
好在取血 2h 內進行實驗,血液存放時間越長,細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后
分離效果更差甚至不能達到分離目的。
2.本實驗不要使用高聚合材質(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無靜電、低靜電離
心管及未經堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面
會變成毛面,影響細胞分離效果。
3.分離液用量大于稀釋后血液樣本時,分離效果更佳。
4.當血液樣本粘度過高需稀釋時,*稀釋方法:將血液與樣本稀釋液(產品編號:
2010C1119)1:1稀釋混勻備用。注:不當的稀釋方法會降低細胞得率及活性。如血液樣
本經過稀釋則分離過程中需適當降低離心力和離心時間。
5.如實驗后細胞得率或活性過低,請技術以尋求幫助支持。
【儲存條件及有效期】
18-25保存,有效期 2年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
封后置常溫保存。如 4保存,本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】

本實驗白細胞提取率及純度大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例,用戶可適當進行參考。

【相關實驗技術方案】
1.所獲得白細胞的培養技術。
2.所獲得白細胞的核酸提取技術。
3.所獲得白細胞的鑒定方法
A.流式細胞技術
B.免疫組化技術
C.原位雜交技術
D.PCR技術
注:上述技術方案詳情請登陸本搜索“細胞分離、
純化、擴增、鑒定及生物治療技術手冊”,并在說明書項目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決方法】
1.由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:

出現情況

出現原因

建議解決方案

離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層

轉速過小或離心時間過短

適當增減轉速

離心后目的細胞存在于分離液中

轉速過大或離心時間過長

適當增減轉速

離心后白環層彌散

細胞密度過大

調整細胞密度

離心后白環層太淺或看不見

細胞密度過小

調整細胞密度

2.本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地
區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時,恒定離
心時間,對離心轉速進行調整。
3.本分離液依照標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產同類產品略有不同,可
能出現紅細胞沉降不*的情況,可以適當加大離心轉速。
注:在對離心條件進行調整時,離心轉速的加減以 50-100g為基數,直至達到分離效果,
  離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min為準。

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