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如何解決色譜柱使用過(guò)程出現(xiàn)的問(wèn)題

閱讀：3572 發(fā)布時(shí)間：2014-12-29

問(wèn)題:
不同色譜柱間差異
使用期間柱變化
原因:
填料、鍵合相不同
柱床破壞
鍵合相丟失
硅膠基質(zhì)溶解
強(qiáng)保留組分堆積堵塞
表現(xiàn):
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，柱效(N)
問(wèn)題:
柱外效應(yīng)
原因:
系統(tǒng)差異、進(jìn)樣量大、進(jìn)樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)、檢測(cè)器流通池體積大、接頭死體積大等。
表現(xiàn):
柱效（N)
問(wèn)題:
分離效果變差
原因:
流動(dòng)相組分改變
流速改變
溫度改變
表現(xiàn):
保留因子(k)，柱效變化很小
保留因子(k)，分離因子（α）
保留因子(k)，柱效變化很小
問(wèn)題:
柱平衡慢
原因:
重新平衡時(shí)間不夠
柱超載樣品量太大
表現(xiàn):
保留因子(k)，柱效變化很小
保留因子(k)，柱效(N)
造成色譜峰（不對(duì)稱）拖尾的原因
1．色譜柱本身填裝問(wèn)題,篩板堵塞或填料塌陷；
2．柱頭有污染；
3．樣品超載；
4．樣品溶劑不合適；
5．柱外效應(yīng)；
6．化學(xué)或二次保留（硅羥基）效應(yīng)；
7．緩沖容量不足或不合適；
8．重金屬污染。
如何解決峰形拖尾的問(wèn)題
A. 與化學(xué)有關(guān)的拖尾問(wèn)題
1．流動(dòng)相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3.降低進(jìn)樣量至<1μg。
B. 與色譜柱有關(guān)的拖尾問(wèn)題
1.如柱頭處有強(qiáng)保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；
2.使用保護(hù)柱。
C. 與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬
1.進(jìn)樣體積過(guò)大，（通常≤25μL）；
2.進(jìn)樣閥與色譜柱及檢測(cè)器之間的管路體積過(guò)大（*連接管應(yīng)<20cm，內(nèi)徑為0.007"）；
3.檢測(cè)器流通池的體積過(guò)大。

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