液相色譜儀的發(fā)展并不局限
液相色譜儀檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。 液相色譜儀紫外檢測器應(yīng)用于對紫外光有吸收的藥物，大多數(shù)藥物分子對紫外光有吸收，故能較普遍采用，檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長型、可變波長型及掃描器，既能使流動相停流作組分的定性定量檢測，又能提高測定靈敏度，重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。80年代應(yīng)用激光替代氙燈光源，光強度增加了3~4倍，對某些藥物的檢測限可達(dá)pg級。電化學(xué)檢測器是由一個碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類及有酚類基團的各種藥物和代謝物。流出組分進入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流，放大后檢測，檢測限pg級。
液相色譜儀的化學(xué)鍵合固定相是利用化學(xué)反應(yīng)將有機分子鍵合到載體表面上，形成均一、牢固的單分子液膜。特點如下：
1、固定相不易流失，柱的穩(wěn)定性和壽命較高。
2、能耐受各種溶劑，可用于梯度洗脫。
3、表面較為均一，沒有液坑，傳質(zhì)快，柱效高。
4、能鍵合不同基團以改變其選擇性。如鍵合氰基和氨基等極性基團用于正相色譜，鍵合C2、C4、C6、C8、C18、C22烷基和苯基等非極性基團用于反相色譜，鍵合離子交換基團用于離子色譜等。
因此，化學(xué)鍵合固定相是液相色譜儀較為理想的固定相。
液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)， 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)， 在兩相中作相對運動時， 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程， 各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別， 被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出， 通過檢測器時， 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
液相色譜儀流動相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動相放于貯液瓶中，經(jīng)過有濾過頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進入色譜柱，zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法(isocratic dlution)，即自洗脫開始到結(jié)束，溶劑的配比恒定。另一類為梯度洗脫法(gradicnt clution),即使溶劑的極性強度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，從而使同一個試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離，而整個液相色譜儀色譜過程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相液相色譜法中。
