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免疫金細胞化學方法

時間:2011-7-29閱讀:2248
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Geoghegan等于1978年應用免疫金探針檢測B淋巴細胞表面抗原建立了免疫金法(1GS)。IGS的特點是染色程序簡便,不需要顯色,既能檢測細胞表面的抗原,又能檢測細胞內(nèi)抗原。
下面以人肝組織HBsAg的定位檢測為例說明間接免疫金法的步驟。
(1)石蠟切片一脫蠟復水至PBS。
(2)0.1%胰蛋白酶消化切片10rain或3mol/L尿素消化30rain。
(3)用蒸餾水振洗5minX2。
(4)用0.02mol/L TBS(pH8:2)振洗10rainX2。
(5)1%卵蛋白(EA)封閉10min。
(6)稀釋鼠抗HBsAg單克隆抗體[用0.02mol/1 TBS(pH8.2),作1:100稀釋],4℃環(huán)境下過夜。
(7)0.02mol/L TBS(pH8.2)振洗10rainX2。
(8)1%EA封閉10min。
(9)0.02mol/L TBS(pH8.2)稀釋兔抗鼠金標抗體(1:8)37℃45min。
(10)0.02mol/I TBS(pH8.2)振洗10rainX2。
(11)蒸餾水振洗5minX2。
(12)1%戊二醛,作用10min。
(13)蒸餾水浸泡5min。
(14)用蘇木素襯染核lmin,甘油封片。
結(jié)果:在光學顯微鏡下可見部分肝細胞漿內(nèi)有金顆粒聚集呈紅色,沿細胞膜分布,表明有HBsAg定位在細胞漿內(nèi)

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