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大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）說明書
閱讀：798 發布時間：2012-3-14大鼠腫瘤壞死因子 α （ TNF- TNF- TNF- TNF- α ） 酶聯免疫 分析
試劑 盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T 96T 96T 96T
10ng/L-360ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測定 大鼠血清、血漿及相關液體樣本中 小鼠腫瘤壞死因子 α （ TNF- α ）
含量 。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定 標本 中 大鼠腫瘤壞死因子 α （ TNF- α ） 水平。用純化
的 大鼠腫瘤壞死因子 α （ TNF- α ） 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中
依次加入 腫瘤壞死因子 α （ TNF- α ） ， 再與 HRP 標記的 腫瘤壞死因子 α （ TNF- α ） 抗體結
合，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物 ，經過*洗滌后 加 底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶
的催化下轉化成藍色 ， 并在酸的作用下轉化成zui終的黃色 。 顏色的深淺和樣品中的 腫瘤壞死
因子 α （ TNF- α ） 呈正相關 。 用酶標儀在 450 nm 波長下測定吸光度 （ OD 值 ） ， 通過標準曲
線 計算樣品 中 大鼠腫瘤壞死因子 α （ TNF- α ） 濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml × 1 瓶 7 終止液 6ml × 1 瓶
2 酶標試劑 6ml × 1 瓶 8 標準 品（ 720ng/L ） 0.5ml × 1 瓶
3 酶 標包被 板 12 孔 × 8 條 9 標準品 稀釋液 1.5ml × 1 瓶
4 樣品 稀釋液 6ml × 1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑 A 液 6ml × 1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 6ml × 1/ 瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1 ．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可 將標本放于 -20 ℃ 保存，但 應 避免反復凍融
2 ．不能檢測含 NaN3 的樣品 ，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（ HRP ）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋 ： 本試劑盒提供原倍標準品一支 ， 用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
360ng/L 5 號標準品 150 μ l 的原倍標準品加入 150 μ l 標準品稀釋液
180ng/L 4 號標準品 150 μ l 的 5 號標準品加入 150 μ l 標準品稀釋液
90ng/L 3 號標準品 150 μ l 的 4 號標準品加入 150 μ l 標準品稀釋液
45ng/L 2 號標準品 150 μ l 的 3 號標準品加入 150 μ l 標準品稀釋液
22.5ng/L 1 號標準品 150 μ l 的 2 號標準品加入 150 μ l 標準品稀釋液2. 加樣 ： 分別設空白孔 （ 空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ， 其余各步操作相同 ） 、 標準孔 、
待測樣品孔 。 在酶標包被板上標準品準確加 樣 50 μ l ， 待測樣品孔中先加樣品稀釋 液 40 μ l ，
然后再加待測樣品 10 μ l （樣品zui終稀釋度為 5 倍 ） 。 加樣將樣品加于酶標板孔底部 ， 盡
量不觸及孔壁， 輕輕 晃動 混勻 。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37 ℃ 溫育 3 0 分鐘 。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體， 甩干 ，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50 μ l ，空白孔除外 。
7. 溫育：操作同 3 。
8. 洗滌：操作同 5 。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 μ l ，再加入顯色劑 B50 μ l ，輕輕震蕩混勻， 37 ℃ 避光顯 色
15 分鐘 .
10. 終止：每孔加終止 液 50 μ l ，終止反應 （此時藍色立轉黃色 ） 。
11. 測定 ： 以空白空調零 ， 4 50 nm 波長依序測量各孔的 吸光 度 （ OD 值 ） 。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標， OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品 的OD 值由標準曲線查出相應的濃度 ； 再乘以 稀釋倍數 ； 或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式 ， 將樣品的 OD 值代入方程式 ， 計算出樣品濃度 ， 再乘以 稀釋倍數 ，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1 ．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2 ． 濃洗滌液 可能 會有 結晶 析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶 ，洗滌時不影響結果。
3 ．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4 ． 請每次測定的同時做標準曲線 ， 做復孔 。 如標本中待測物質含量過高 （ 樣本 OD 值
大于標準品孔*孔的 OD 值 ） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（ n 倍）后再測定 ， 計
算時請zui后 乘以 總稀釋倍數（ × n × 5 ） 。
5 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6 ．底物請避光保存。
7 ．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準 .
8 ．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9 ．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1 ． 試劑盒保存 ： ； 2-8 ℃ 。
2 ．有效期： 6 個月