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技術文章

熱愛ELISA實驗的新手們需注意這些細節

閱讀:1656          發布時間:2018-11-28

    今天,我公司技術專員特意為大家準備十幾條ELISA操作的重點細節,閱讀之后可以總結一下您在實驗中有哪些重點被忽略掉了。熱愛ELISA實驗的新手們需注意這些細節:
 

  1.不管是試劑盒,還是其它產品,在使用之前我們都要仔細閱讀說明書。
  2.同樣的,一定要確定試劑盒是不是在有效期內。
  3.按說明書確定所有試劑齊全(數量、體積)。
  4.標本制備要規范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內無法實驗者,注意低溫保存。
  5.ELISA實驗中為了確定*信號和低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規提供的范圍進行操作。
  6.標準品的配制:對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書,注意每批的細節。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節,將凍干的細胞因子復溶。
    
  7.一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標準的elisa操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。
  8.根據檢測標本數量確定所需試劑的量。
  9.按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑,DIY夾心法ELISA常見技術指南。
  10.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。
  11.為了優化靈敏度,建議過夜孵育標準品和標本。
  12.若使用過氧化物酶作為顯色系統,應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
  13.當測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
  14.準備好所有實驗額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等。
   

    了解更多ELISA實驗技術資料,歡迎您致電給我公司業務員咨詢。

 

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