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UPTT™ 未激活的部分凝血活酶時間檢測使用說明書

貨號：105997

品名：UPTT™ Reagent (3mL)

產(chǎn)品描述：

UPTT是標(biāo)準(zhǔn)化凍干兔腦腦磷脂（部分凝血活酶），磷脂濃度≤0.1％，可代替血小板提供凝血催化表面，是進(jìn)行活化部分凝血酶時間測試的理想試劑。該試劑符合包括ASTM F2382-01,04,12，F(xiàn)DA藍(lán)皮書備忘錄E95-1和ISO 10993-4中規(guī)定的血液相容性評估要求。

用途：

生物相容性或?qū)ι挠绊懯轻t(yī)療或血管設(shè)施是否適合于體內(nèi)使用的關(guān)鍵衡量指標(biāo)，UPTT檢測試劑用于體外測定未激活的部分凝血活酶時間，通過測量關(guān)鍵凝血酶活性來特異性評估醫(yī)用設(shè)備和材料對血液或血液相容性的影響。

檢測原理：

在缺乏鈣離子的情況下，全血暴露在外源物質(zhì)時發(fā)生接觸激活^[1,2,3]。UPTT通過檢測凝血時間來測量參與內(nèi)源性血漿促凝血酶原生成的血漿因子^[4,5]。該檢測應(yīng)重復(fù)三次，將檢測結(jié)果與非處理血漿和陰性對照進(jìn)行比較。

產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：

UPTT試劑已經(jīng)過手動和光學(xué)檢測系統(tǒng)的測試，具有可靠的精度和靈敏度，可為基于接觸活化的血液相容性和血栓形成試驗(yàn)提供可靠的結(jié)果^[1.3,6,7]。

試劑盒包含：

20 x 3.0mL的UPTT試劑，

含約~0.1%兔腦腦磷脂，緩沖液和穩(wěn)定劑。

試劑儲存：

凍干的UPTT試劑可在2-8°C儲存直至有效期；在原裝容器中重懸的UPTT試劑可于2-8°C密閉儲存7天。

注意事項(xiàng)：

（1）本試劑不得用于人體或動物診斷測試。

（2）在整個試劑準(zhǔn)備，樣本收集，樣本制備和分析過程中須嚴(yán)格遵守標(biāo)準(zhǔn)的預(yù)防措施。

（3）根據(jù)實(shí)驗(yàn)室管理制度處理銳器（如針頭等）和生物廢棄物。

額外所需材料（本試劑盒未提供）：

1.純化水，pH 5.3 - 7.2（蒸餾水，去離子水或試劑級）

2.移液器（10ml, 3ml和0.1mL）。

3.氯化鈣，0.025M（C / N 100989）

4.檸檬酸鈉，0.11M（C / N 100994）

5.凝血參照血漿

檢測準(zhǔn)備

試劑配制：

在試劑配制前將UPTT小瓶置于室溫。

1.輕輕敲擊小瓶使附著在塞子上的試劑掉于瓶底；

2.取下鋁質(zhì)密封圈；

3.取出塞子，用3.0 mL純凈水溶解小瓶內(nèi)容物。

4.蓋上塞子并翻轉(zhuǎn)小瓶以*混合內(nèi)容物。在使用前至少要保持15分鐘以確保內(nèi)容物*溶解。

注意：試劑一旦配置完成，在2 - 8°C儲存在密封的原始容器中可穩(wěn)定7天。

測試血漿的采集：

UPTT檢測的樣本必須是由抗凝血全血制備的無血小板或貧血小板血漿。^[8-10]

樣本采集

采血時應(yīng)小心謹(jǐn)慎，當(dāng)血液在收集管中可見時立即釋放止血帶，避免停滯，溶血，組織液污染或暴露于玻璃表面。

（建議使用）^[10]

1.采用實(shí)驗(yàn)室的蝶翼式采血管套，
2.將血液抽入含有0.11M檸檬酸鈉抗凝血劑的真空塑料標(biāo)本收集管，

3. 輕輕顛倒試管4-5次以混勻樣本。

注意：確認(rèn)使用的抗凝劑類型和濃度，彩色標(biāo)本管頭不能*顯示檸檬酸鹽的濃度。

注射器采血（可選）^[11]

1.采用實(shí)驗(yàn)室的蝶翼式采血管套，

2.抽取9.0mL血液進(jìn)入塑料注射器中，避免吸力過大。

3.取下針頭，立即輕輕地將血液加入到含有1.0mL 0.11M檸檬酸鈉（血液：抗凝血劑為9：1）的聚丙烯管中，

4..蓋上試管并輕輕顛倒4-5次混合，

5.在測試前在室溫下樣品zui多保持2小時。

貧血小板血漿制備（以下兩種方法均可）

（一）PDQ®血小板功能離心機(jī)

1.將樣品放入PDQ，

2.選擇PFP設(shè)置，

3.按下開始鍵。

（二）臺式離心機(jī)制備貧血小板血漿^[10,12-14]

1.將樣品放入離心機(jī)中

2.在2500×g離心15分鐘。

收獲樣品

1.使用塑料移液器

2.小心地吸取貧血小板血漿，小心勿接觸白細(xì)胞層（白膜層）。

3.將樣品轉(zhuǎn)移到塑料管并蓋上蓋子。

4.樣品在測試前可以在15 - 28°C下保存zui多兩個小時。

注意事項(xiàng)：

（1）廢棄管的收集應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室管理制度。

（2）當(dāng)紅細(xì)胞壓積<30％或> 55％時需根據(jù)樣本的血細(xì)胞比容調(diào)整標(biāo)本體積使血液比抗凝劑為9比1。^[4,10,15]

（3）在手術(shù)過程中，不要將全血樣本或測試樣本暴露在玻璃表面。^[12,14]

（4）不要對明顯溶血，黃疸或脂血癥的樣品進(jìn)行UPTT測試。^[10]

注意：為獲得*檢測結(jié)果，溶解的UPTT試劑的應(yīng)在使用前一刻通過磁力攪拌或輕輕顛倒混勻，或使用塑料涂層的一次性攪拌棒攪拌。

檢測步驟

部分凝血活酶時間終點(diǎn)可通過凝血分析儀和手動凝血方法檢測。

凝血分析儀檢測法

凝血分析儀測試方法與用于激活的部分凝血活酶時間測試（aPTT）的方法相同，按照儀器說明進(jìn)行檢測即可。注意必須采用實(shí)驗(yàn)室測試的UPTT參考范圍^[16]，所有測試應(yīng)重復(fù)進(jìn)行三次。 間接血液接觸的檢測設(shè)備需要1克樣品，直接血液接觸的檢測設(shè)備需要2.5克樣品。 必須控制檢測中設(shè)備與測試樣品接觸的時間。

手動檢測

注意：此測試程序僅適用于手動方法，如使用自動或半自動分析儀，請按照分析儀操作手冊中的說明進(jìn)行操作。

1.將0.1mL測試或?qū)φ?/span>血漿移入測試比色杯中，并在37℃下孵育血漿2分鐘

2.在37℃下預(yù)孵育0.025M氯化鈣

3.將0.1mL UPTT試劑移入含有血漿的測試容器中。

4.在37°C孵育血漿/試劑混合物2到5分鐘或根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)方案確定。

5.加入0.1mL預(yù)孵育的氯化鈣，同時啟動計(jì)時器。

6.記錄凝血時間。

所有測試應(yīng)重復(fù)進(jìn)行三次。 間接血液接觸的檢測設(shè)備需要1.0克樣品，直接血液接觸的檢測設(shè)備需要2.5克樣品。 必須控制檢測中設(shè)備與測試樣品接觸的時間。

檢測結(jié)果

UPTT測試凝血終點(diǎn)的結(jié)果應(yīng)以秒為單位。測試和參照均應(yīng)重復(fù)測試三次，結(jié)果取平均值，然后與實(shí)驗(yàn)室已建立的參考范圍進(jìn)行比較。^{[12,14,15,17]}

測試結(jié)果中應(yīng)包括表示測試有效性的p值，比較未暴露血漿的平均結(jié)果與暴露于檢測裝置的血漿的結(jié)果，要通過測試，設(shè)備統(tǒng)計(jì)的p值必須≥0.05。

預(yù)期結(jié)果，正常血漿和對照1,2和3的CV應(yīng)小于5％。

正常血漿: >60秒

Level 1: >60 秒

Level 2: > 90 秒

Level 3: >120秒

注意：使用UPTT在光電光分析儀上用正常對照血漿進(jìn)行測試時，結(jié)果將大于60秒，接觸激活會縮短這一時間。由于檢測方法和分析儀/人員之間的操作的差異，每個實(shí)驗(yàn)室必須為UPTT檢測建立參考范圍。實(shí)驗(yàn)方案，樣品制備和終點(diǎn)確定方法均可能會影響測試結(jié)果。

影響因素：

UPTT測試結(jié)果的度和準(zhǔn)確性可能受到許多因素的影響。實(shí)驗(yàn)方案和實(shí)驗(yàn)室間的差異來自用于測量凝固終點(diǎn)的凝血系統(tǒng)的數(shù)量.5,15在同一實(shí)驗(yàn)室中影響測試結(jié)果的因素包括用于溶解試劑的純凈水的pH值，移液技術(shù)，孵育時間和溫度的把握，試劑污染或試劑批號的變化等^[18,19]。定期進(jìn)行質(zhì)量控制測試有助于確定和排除影響測試結(jié)果的因素。

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