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熒光金---神經(jīng)逆行示蹤檢測COA

2016-2-15  閱讀(3687)

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Hydroxystilbamidine (FluoroGold)

Catalog #: 780000

Selection:20 mg

Price:2600

 

Product Description

Hydroxystilbamidine has been used extensively as a retrograde tracer for neurons and also a histochemical stain. Please also see hydroxystilbamidine 4% in H2O (80023), which is a more convenient, ready-to-use form.

  • λExEm = 361/536 nm

  • Yellow solid soluble in water

  • Store at 4°C and protect from light

  • C18H24N4O7S2

  • MW: 473

FluoroGold is a trademark of Fluorochrome, LLC.

MSDS (PDF): MSDS 80014

相關應用資料:

神經(jīng)示蹤劑應用背景神經(jīng)示蹤劑常用于闡明神經(jīng)系統(tǒng)的解剖。示蹤劑可以順行,從軸突到胞體;也可以逆行,從胞體到軸突。在這些示蹤劑的幫助下,可以確認軸突的起源細胞,他們支配某種特定結構形成;也可以鑒別從某一特定的神經(jīng)元出來的軸突投射的目標位置。

Fluoro-GoldTM 熒光金(神經(jīng)逆行示蹤檢測)

產(chǎn)品背景

Fluoro-GoldTM是當今世界上應用zui普遍和非常有效的神經(jīng)逆行示蹤劑,F(xiàn)luorogold也稱為羥脒替(hydroxystilbamidine),是Fluorochrome, LLC.公司的專有產(chǎn)品,于1985年開始范圍內銷售。

Fluoro-GoldTM antibody (抗體)為Fluorochrome, LLC.特別開發(fā)的高靈敏度抗體,能夠大幅度增強Fluorogold的可見度。Fluorochrome, LLC.公司1998年引進該抗體以來,不僅大量文獻研究證實其有效性,而且成為行業(yè)檢測的金標準。

產(chǎn)品優(yōu)勢

1)Fluoro-Gold(熒光金)的產(chǎn)品優(yōu)勢:

﹄ 極其強效的神經(jīng)逆行熒光示蹤劑,靈敏度高且結果穩(wěn)定;

﹄ 不會非特異性結合傳代中未損傷的纖維;

﹄ 不會滲出逆行標記的神經(jīng)元;

﹄ 標記神經(jīng)元存活周期廣,1天或者高于1個月;

﹄ 可用壓力注射或者離子透入(iontophoresed)的方法將染料導入動物體內;

﹄ 與zui常用的其他幾種神經(jīng)解剖技術相兼容,比如免疫熒光術(IF),免疫細胞化學(ICC),放射自顯影技術,過氧化物酶免疫組化(HRP-IHC),石蠟包埋和其他逆行熒光示蹤劑

﹄ 操作簡便安全,保質期長;*可靠的材料來源;

2)Fluoro-Gold(熒光金)與Fluoro-Gold抗體結合使用的優(yōu)勢:

﹄ 大幅度增強熒光金標記的可視度;

﹄ 允許更的解剖標測

﹄ 顯示相當細微的解剖結構包含樹突,軸突和軸突末梢

應用圖片:

http://www.fluorochrome.com/images/VTA-40X.jpg  http://www.fluorochrome.com/images/Hypo-40X.jpg

Left: VTA (40X) after Fluoro-Gold injection in the accumbens.  Antibody is at 1/100,000.

Right: Hypothalamic cells along the 3rd left ventricle (40X) after Flouro-Gold injection in the PVN.  Antibody is at 1/50,000.

產(chǎn)品使用

1)Fluoro-Gold(熒光金)單獨標記技術

﹄ 溶解體系(vehicle):溶于蒸餾水,0.9%生理鹽水,或溶于0.2M中性磷酸鹽緩沖液配置成懸浮液

﹄ 染液濃度:有效染色濃度范圍1-10%。初次實驗推薦使用濃度4%。 如果注射部位發(fā)生意外壞死,或者標記過于密集,可降低濃度至2%。Fluoro-Gold分子量為532.6 daltons。

﹄ 注射方法:壓力注射;離子透入;或者晶體注入;

﹄ 術后存活時間:好的逆行神經(jīng)示蹤標記一般在術后2天~2個月內觀察到。通常情況下術后的存活周期是3~5天。在染料不會向胞外擴散的前提下存活時間長能夠改善遠端神經(jīng)末梢的填充。

﹄ 固定:差不多同所有固定方式兼容,或者也可不做固定;常常使用含4%甲醛的中性生理緩沖鹽作為固定劑。注:含高濃度重金屬(如鋨,汞)的固定劑會導致熒光淬滅,另外含高濃度(>1%)戊二醛可能會加深背景熒光;

﹄ 組化處理:含F(xiàn)luoro-Gold的組織樣本幾乎與所有通用的組化處理技術兼容,經(jīng)常使用的是固定組織的冰凍切片(20 µm)。另還包含未固定組織的恒冷切片(10 µm);塑料(0.2-4 µm)或石蠟(3-10 µm)包埋的薄切片;

﹄ 聯(lián)合檢測:切片進一步處理用于第二種標志物(marker)的檢測如放射自顯影,HRP組化分析;免疫細胞化學;第二種熒光示蹤劑;熒光素復染等等。

﹄ 封片,清洗和蓋片:切片通常黏附在明膠包被的載玻片上,風干,二甲苯浸漬,然后加入非熒光的DPX塑性封片劑來蓋片;

﹄ 觀察與拍照:熒光金可直接用熒光顯微鏡觀察,使用寬帶紫外激發(fā)濾光片。顏色:中性pH緩沖液處理組織發(fā)射金色光;酸性pH緩沖液(如pH=3.3)處理組織發(fā)射藍色;也可以用數(shù)碼拍照或者膠片曝光來記錄結果。

2)Fluoro-Gold(熒光金)+ Fluoro-Gold antibody(熒光金抗體)的組合標記技術

﹄ 抗體特性:兔多克隆(100 µl,1:100 dilutionl),BSA diluent (50 mM KPBS, 0.4% Triton, 1% BSA, 1% NGS)稀釋500~1,000×,與 Vector elite kit結合使用大概可做300~1000張切片。

﹄ 抗體使用:熒光金注射入動物體內之后,漂片(以灌注4%甲醛的大鼠腦組織切片,30 µm為例)在Fluoro-Gold 抗體工作液中4度孵育18小時后,清洗,然后用生物素化GAR(Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody ,1:1000,Cat#:BA-1000)室溫孵育1h,之后清洗。 切片再用Avidin/Biotin(1:1000, vector, Cat#:PK6100)孵育1h,之后轉入DAB顯色底物孵育6 mins(Diaminobenzidine (.04%) and Nickel Chloride (2.5%) in 0.1 M NaAcetate with 0.06% H2O2)。切片zui后進行清洗,組織黏合,干燥,脫水和蓋片。

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