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上海研謹生物科技有限公司

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斑點雜交實驗服務

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更新時間:2025-01-02 16:48:29瀏覽次數:1586次

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產地類別 國產 應用領域 醫療衛生,生物產業
提供商: 上海研謹生物
服務名稱: 斑點雜交實驗服務
規格: 實驗服務
價格: 2000元

斑點雜交實驗服務

 

 

實驗技術簡介:斑點雜交(Dotblot) 是將被檢標本點到膜上,烘烤固定。這種方法耗時短,可做半定量分析。- 張膜上可同時檢測多個樣品,為使點樣準確方便,市售有多種多管吸印儀(Manifold) , 如MinifoldI和II. Smart Botter(Wealtec).Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot,它們有許多孔,樣品加到孔中,在負壓下就會流到膜上呈斑點狀或狹縫狀。反復沖洗進樣孔,取出膜烤干或紫外線照射以固定標本,這時的膜就可以進行雜交。

 

實驗技術原理:

斑點雜交是指將待測的DNA變性后點加在硝酸纖維素膜(或尼龍膜、NC膜)上, 用已標記的探針進行雜交,洗膜(除去未接合的探針), 放射自顯影,判斷是否有雜交及其雜交強度,主要用于基因缺失或拷貝數改變的檢測。

 

實驗操作流程:

1. DNA斑點雜交

①先將膜在水中浸濕,再放到15*SSC中。

②將DNA樣品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。

③用鉛筆在濾膜上標好位置將DNA點樣于膜上,每個樣品-般點5ul(2~10μg DNA)。

④將膜烘干,密封保存備用。

2、RNA斑點雜交

與上法類似、,每個樣品至多加10μg總RNA (經酚/氨0仿或異硫青酸胍提取純化)。 方法是將RNA溶于5μl DEPC水,加5μI甲醛/SSC緩沖液(10*SSC中含6.15moI/L甲醛) ,使RNA變性,然后取5-8μI點樣于處理好的濾膜上,烘干。

3、完整細胞斑點雜交

應用類似檢測細菌菌落的方法,可以對細胞培養物的特異序列進行快速檢測,將整個細胞點到膜上,經NaOH處理,使DNA暴露、變性和固定,再按常規方法進行雜交與檢測。有人曾用此法從105個培養細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點印跡法可以用于篩選大量標本,因為它使細胞直接在膜上溶解,所以DNA含量甚至比常用的提取法還高,又不影響與32P標記的探針雜交,但它不適用于非放射性標記探針,因為DNA純度不夠,會產生高本底。

 

實驗注意事項:

客戶提供:

TotalRNA (DNA) ≥20ug,濃度> 1ug/ul, A260/A280>1.8;提供標記后的探針,需同時告知標記后探針的濃度及活性,待檢測目的基因的Genbank序列號。

 

交付標準:

1、圖片

2.完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數據分析、實驗結果)

其他:

1.點樣量不要太大,否則雜交后,X光片上點太大,互相影響。

點樣前尼龍膜無需預處理,點樣后自然晾干后, 分別在變性液和中和液中進行變性和中和。

 

收費標準/服務周期/提供結果:

歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。

更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢! 

 

 

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