層析柱使用常見問題盤點
“ 層析柱進氣泡怎么辦？ ”
答疑解惑層析柱進氣泡有多種可能的原因，對于這些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解決氣泡困擾：
1.空氣進入層析柱（如：緩沖液走空，連接層析柱進入系統過程中等）
用純水反向沖洗層析柱（如有柱位閥可直接切換流向，沒有的話可將柱子反接
對于大多數層析柱來說可用乙醇沖洗，以提高排除氣泡的效率
2.緩沖液中有氣泡采取預防措施將緩沖液脫氣
在緩沖液入口使用空氣感應器
使用限流閥
3.溫度影響（在冷室操作后緊接著在室溫操作或低溫緩沖液直接在室溫使用）采取預防措施允許緩沖液在使用前達到熱平衡
“ 層析柱干了還可以再使用嗎？ ”
答疑解惑通常來說是不可以的，但也取決于您的純化需求。如果您的層析柱看起來像圖中這樣，不妨一試。可將溶液以接近填料zui大耐受壓力的流速流經層析柱以排除空氣。結束之后，進行柱效測定，滿足您的要求便可繼續使用；如未成功排除氣泡，則層析柱需要重裝。
“ 膠平面與柱頭有間隙怎么辦？ ”
答疑解惑造成間隙的有多種可能的原因，對于這些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解決間隙困擾
1.由于不當裝填或者篩網孔徑與填料粒徑不匹配，導致填料漏出
更換篩網，重新裝填
2.層析柱堵塞，導致反壓增大
根據說明書清洗層析柱
更換濾膜采取預防措施澄清樣品
3.柱床裝填太差（裝柱過程中未有效壓縮填料）
調整柱頭高度，測柱效
4.填料被用于條件，如有機溶劑
檢查緩沖液選擇更加合適的使用條件
“ 怎樣避免由于樣品導致的壓力增大 ”
答疑解惑不同雜質會帶來不同的不良影響，對于這些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解決壓力增大困擾
1.顆粒性物質——堵塞濾膜和層析柱離心過濾有吸附的小體積樣品可用10000 g 離心15分鐘
細胞裂解液可50000g離心30分鐘過濾醋酸纖維素膜或PVDF膜具有zui少的非特異性蛋白吸附
選擇合適孔徑的濾器
2.沉淀——聚集體堵塞層析柱
過濾
通過改變pH，加鹽或添加劑穩定樣品或減少聚體產生
避免機械壓力和過高的蛋白濃度
3.核酸——過高粘度可能會封閉填料上的配基
加入核酸酶
使用硫酸鏈霉素，聚乙烯亞胺或硫酸魚精蛋白沉淀
4.脂類——可能封閉填料上的配基或堵塞濾膜和層析柱
離心
使用硫酸銨，硫酸葡聚糖或PVP沉淀
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