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巨細胞病毒抗體IgG（CMVAb-IgG）檢測
閱讀：1265 發(fā)布時間：2010-8-10
巨細胞病毒抗體IgG（CMVAb-IgG）檢測
[測定方法] ELISA法
[方法學原理] 在微孔表面包被純化的巨細胞病毒抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在巨細胞病毒抗體-IgG可與微孔上抗原相結合。然后洗去未結合物質，再加入酶聯(lián)液，與抗原抗體復合物結合。洗去過量的酶聯(lián)液。zui后加入底物和色原（顯色液）。在特定時間終止酶聯(lián)液的催化反應。所產生的顏色強度與標本中巨細胞病毒抗體-IgG含量呈正相關。通過酶標儀與校正和對照相比，讀出結果。
[標本準備] 靜脈抽血2ml，不抗凝。
[試劑]
1．微孔板
2．樣品稀釋液
3．HRP-抗人IgG酶結合物
4．陰性對照
5．陽性對照
6．洗滌劑
7．TMB顯色液
8．終止液
[儀器設備] 酶標儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。
[測定步驟]
1．吸取5u1血清標本加入250gl標本稀釋液中，做1：51稀釋。
2。吸取l00ull稀釋過的血清、陽性對照、陰性對照和校正液（不稀釋），加人微孔板內，設空白對照l孔。振蕩，混勻，去除孔內液體中氣泡，室溫環(huán)境中孵育20min。
3，棄去孔內液體，用洗滌液洗5次。
4。每孔再加入100gl酶聯(lián)結合物，室溫環(huán)境中孵育20min。
5。棄去孔中酶聯(lián)液，用洗滌液洗5次。
6，每孔加入100ul TMB顯色液，室溫環(huán)境中孵育10min。
?。每孔加入100ul終止液，終止反應，充分混勻。
8。用酶標儀（波長為450nm）讀取吸光度。以待測樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性。
[注意事項]
1．整個檢測過程應符合實驗室質量手冊和生物安全守則規(guī)定，嚴防交叉污染。
2．所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
3．試劑應保存于2～8℃冰箱，使用前應在室溫環(huán)境中平衡30min。
4．洗滌時各孔均應加滿洗滌液，防止孔內有游離酶未洗凈，每次洗板后均應在吸水紙上拍干。
5．血標本應分離出血清保存，2～8℃可保存?d，冷凍保存可至6個月，避免反復凍融。
6．試劑在儲存或使用過程中，禁止過熱、曝曬或強光。
[正常參考值] CMVAb—IgG陰性
[臨床意義] 巨細胞病毒可引起先天性和后天性多種感染。原發(fā)性感染可引起肝炎、傳染性單核細胞增多癥或輸血后綜合征。宮內感染則是由于孕婦體內的CMV通過胎盤使胎兒在宮內受染所致，是人巨細胞病毒感染的重要途徑之一。受染胎兒多數(shù)為隱性感染，但有時后果較為嚴重，尤其是在懷孕早期，更易造成胎兒損害。出現(xiàn)小頭畸形、肢體畸形、先天性心臟病、斜眼、失明、流產、死胎、早產等。
CMVAb—IgM陽性表明新近存在CMV感染，對于嬰幼兒患者可用于早期診斷。由于孕婦外周血IgM型抗體不能通過胎盤屏障，所以若新生兒臍血CMVAb—IgM檢測陽性則可診斷CMV宮內感染（采集臍血標本時應注意避免母血污染）。嬰幼兒外周僅血清單—CMV Ab-IgM檢測陽性者，應連續(xù)隨訪6～12個月，觀察其滴度是否有顯著意義的升高。成人人群中CMV Ab-IgG檢出率很高，CMVAb-IgG僅用于成人流行病學調查。
另外，少部分患者再次感染巨細胞病毒時，可再次出現(xiàn)CMVAb-IgM陽性。特別是器官移植患者再次發(fā)生CMV感染時，CMVAb-IgM重新出現(xiàn)陽性的比例非常高。