成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

您好, 歡迎來到化工儀器網

| 注冊| 產品展廳| 收藏該商鋪

17801761073

technology

首頁   >>   技術文章   >>   質粒提取常見問題分析

上海索寶生物科技有限公司

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務

質粒提取常見問題分析

閱讀:8819      發布時間:2010-10-24
分享:

 

質粒提取常見問題分析
 

常見問題
可能原因
建議解決方案
未提出質粒或質粒得率較低
大腸桿茵老化
請涂布平板培養后,重新挑選新茵落進行液體培養。
質粒拷貝數低
由于使用低拷貝數載體引起的質粒DNA提取量低,可更換具有相同功能的高拷貝數載體。
菌體中無質粒
有些質粒本身不能在某些菌種中穩定存在,經多次轉接后有可能造成質粒丟失。例如,柯斯質粒在大腸桿菌中長期保存不穩定,因此不要頻繁轉接,每次接種時應接種單菌落。另外,檢查篩選所用抗生素種類和工作濃度是否正確。
堿裂解不充分
使用過多的菌體培養液,會導致菌體裂解不充分,此時可減少菌體用量或增加溶液P1、P2和P3的用量。對低拷貝數質粒,提取時可加大菌體用量并加倍使用溶液P1、P2和P3,可能有助于增加質粒提取量和提高質粒質量。
溶液使用不當
溶液P2和P3在溫度較低時可能出現渾濁,應置于37℃保溫一段時間,直至溶液變為清亮后才能使用。
質粒未全部溶解(尤其質粒較大時)
洗脫溶解質粒時,可適當加溫或延長溶解時間。
洗脫液加入位置不正確
洗脫液應加在硅膠膜中心部位,確保洗脫液能*覆蓋硅膠膜的表面以達到大洗脫效率。
洗脫液不合適
DNA只在低鹽溶液中才能被洗脫,如TE和水;洗脫液pH值過低會降低洗脫效率,應確保洗脫液pH值在7.0-8.5之間,當用水洗脫時確保其pH值在此范圍內;洗脫時可將洗脫緩沖液在65-70水浴預熱,加入洗脫液后在室溫靜置2-5分鐘,可提高洗脫效率。
洗脫體積太小
洗脫液體積若小于30μl,則不易*浸透硅膠膜,使洗脫效率降低;洗脫液體積若超過200μl,則所得的DNA濃度會降低,但DNA總量不會減少。為了得到較高的洗脫效率可以適當增大洗脫液體積。
洗脫時間過短
洗脫時間對回收率也會有—定影響,洗脫時放置2分鐘可達到較好的效果。
堿裂時間過長
加入溶液P2后裂解時間不應超過5分鐘。
質粒純度不高
混有蛋白
菌體不要過量。經溶液P1、P2和P3處理并離心后溶液應為澄清的,如果還混有微小蛋白懸浮物,可再次離心去除。
混有RNA
RNase A處理不*,請減少菌體用量或加入溶液P3后室溫放置一段時間。若溶液P1已保存6個月以上,請在溶液P1中添加RNaseA。
混有基因組DNA
加入溶液P2和P3后應溫和混勻,如果劇烈振蕩,可能把基因組DNA剪切成碎片從而混雜在質粒中。如果加入溶液P2后過于粘稠,無法溫和混勻,請減少菌體用量。細菌培養時間過長會導致細胞和DNA的降解,培養時間不要超過16小時。
含大量核酸酶的宿主菌
宿主菌含大量核酸酶,在質粒提取過程中降解質粒DNA,影響提取質粒DNA的完整性,好選用不含核酸酶的大腸桿菌宿主菌,如DH5α和*0。
質粒的二聚體和多聚體形式
是在質粒復制過程中形成的,與宿主菌相關,電泳可檢測出多條條帶,單酶切處理后可變成單一條帶。
乙醇殘留
漂洗液洗滌后應離心盡量去除柱中殘留液體,并晾干吸附柱。如果DNA已經洗脫出來,可以用酒精沉淀DNA并風干,然后再溶解。

 

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 国产高清av首播原创麻豆| 亚洲性爱av自拍偷拍| 亚洲人成人网毛片在线播放| 久久91精品国产91久久户| 国产成人精品午夜福利| 精品久久中文久久久| 国产日本韩国欧美三级av| 强壮公弄得我次次A片| 欧美乱妇狂野欧美在线视频| 色情韩国电影在线线看| 欧美成 人 网 站 免费| 国产亚洲精品久久精品录音| 99热精品久久只有精品| 久久成人综合亚洲精品欧美| 亚洲精品久久无码午夜一区二区| 亚洲va在线va天堂XX xX| 欧美一区二区三区激情视频| 人妻中文字幕日韩| 无套内射极品少妇CHINESE| www国产亚洲精品久久网站| www春色com| 国产xxwwxxww视频| 免费观看的成年网站不下载| 日韩在线中文字幕一区| 特级做A爰片毛片免费看108| 久久天天躁狠狠躁夜夜躁2014| 影音先锋2017av天堂| 精品精品国产欧美在线| 激情五月色综合国产精品| 老师你下面太紧进不去动态图| 欧美日韩免费二区| 欧美精品在线观看一区二区| 黑料门-今日黑料-最新反差免费| 欧美日韩免费在线| 在线看免费观看AV深夜影院| 看日韩一级黄色片| 男人免费天堂av| 十八禁无遮挡99精品国产| 国产在线黄色| 欧美日韩在线观看一区| 萝稚嫩紧窄h|