陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果
試劑/樣品污染
試劑和樣品可能被污染，或者由于孔之間的濺灑交叉污染。使用新鮮試劑，小心操作移液器。
雌二醇Estradiol檢測(cè)試劑盒- 檢測(cè)抗體與包被抗體反應(yīng)
確定使用的是正確的包被抗體和檢測(cè)抗體,他們之間不會(huì)互相反應(yīng)。
酶標(biāo)板洗板不清楚
用洗液充滿(mǎn)板孔確保每孔被充分洗滌，洗板前確保所有的剩余抗體溶液被倒凈。
抗體量過(guò)多導(dǎo)致非特異結(jié)合
根據(jù)推薦用量使用抗體。盡量使用較少的抗體。
酶標(biāo)板整體背景高
結(jié)合反應(yīng)太強(qiáng)或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
檢查底物的稀釋?zhuān)褂媒ㄗh的稀釋度。當(dāng)酶標(biāo)板顯色足夠進(jìn)行吸光度讀取時(shí)立即用終止液終止反應(yīng)。
底物溶液或終止液不是新配制
使用新配制的底物溶液。終止液應(yīng)該是清亮的（如果它變黃，這是被污染的標(biāo)志，需要重新配制）。
沒(méi)有終止反應(yīng)
如果底物反應(yīng)沒(méi)有被終止，顏色會(huì)繼續(xù)變化。
酶標(biāo)板在酶標(biāo)儀讀板前放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
顏色會(huì)繼續(xù)變化（盡管加了終止液，依然會(huì)以很慢的速度變化)。
試驗(yàn)器皿污染
確保試劑是新配的并且使用的是清潔的玻璃器
底物孵育過(guò)程沒(méi)有避光
底物孵育應(yīng)該在避光條件下進(jìn)行。
孵育溫度過(guò)高
抗體在適宜的溫度下有最佳的結(jié)合活性。確保孵育在正確的溫度下進(jìn)行，孵育箱要設(shè)定好適宜的溫度并正常工作。孵育溫度可能需要一些優(yōu)化。
抗體非特異性結(jié)合
確保進(jìn)行了封閉并使用的是恰當(dāng)?shù)姆忾]液。我們建議使用 5-10% 的與二抗同種動(dòng)物來(lái)源的血清或牛血清。
確保板孔經(jīng)過(guò)預(yù)處理以防止非特異結(jié)合。使用親和力強(qiáng)、純度高的抗體，最好經(jīng)過(guò)了預(yù)吸收。
請(qǐng)檢查針對(duì)“陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果”的建議
吸光度數(shù)值低
使用的樣品中沒(méi)有顯示出靶蛋白或者靶蛋白顯示的水平低
檢查靶蛋白表達(dá)系統(tǒng)，確保它在您的樣品中被表達(dá)出來(lái)。如果靶蛋白的表達(dá)水平低，需要增加樣品使用量，或者您可能需要選擇
一個(gè)更靈敏 的測(cè)定方法。確保您使用的是沒(méi)有超出測(cè)定方法檢測(cè)范圍的陽(yáng)性對(duì)照。
抗體不足
確定使用的是建議的抗體量，為了使結(jié)果更好可能需要增加抗體的濃度。
底物溶液不是新鮮配制或成分有誤
使用前新鮮配制底物溶液。確保儲(chǔ)備液在有效期內(nèi)并且被正確儲(chǔ)存，使用的濃度也是正確的。確保試劑按正確的濃度使用。
試劑不是新鮮配制或pH值有誤
確保試劑配制正確并在有效期內(nèi)。
孵育時(shí)間不夠長(zhǎng)
如果建議了孵育時(shí)間，確保按推薦的時(shí)間長(zhǎng)度孵育抗體。為了使結(jié)果更理想，孵育時(shí)間可能需要增加。
孵育溫度太低
抗體在適宜的溫度下有最佳的結(jié)合活性，確保孵育是在正確的溫度下進(jìn)行，孵育箱要設(shè)定好適宜的溫度并正常工作。孵育溫度可能需要一些優(yōu)化。確保所有的試劑在使用前是室溫。
未加終止液
加入終止液可以增加顯色反應(yīng)的強(qiáng)度，也能固定反應(yīng)最終的顏色。
吸光度數(shù)值高
樣品和/或陽(yáng)性對(duì)照吸光度數(shù)值高。吸光度沒(méi)有按樣品在板子上的稀釋度遞減。
樣品或陽(yáng)性對(duì)照的濃度過(guò)高，超出了試驗(yàn)方法檢測(cè)的范圍。重新設(shè)置試驗(yàn)方法或者在加樣前通過(guò)稀釋降低樣品和對(duì)照的濃度，在處理結(jié)果計(jì) 算濃度時(shí)考慮到所作的稀釋。
酶標(biāo)板上吸光度不規(guī)律
孵育時(shí)酶標(biāo)板疊在一起酶標(biāo)板疊在一起使板子每個(gè)孔的溫度不能平衡一致，請(qǐng)避免堆疊。
吸液不一致
確保移液器使用正確并經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)、確保槍頭插得足夠緊密。板子稀釋時(shí)要特別仔細(xì)，注意確保每個(gè)槍頭都吸上和排出正確量的液體，這對(duì)平 行樣品結(jié)果的一致性有很大影響。
抗體稀釋液/試劑未混勻
為保證板子所有孔的濃度一致，確保所有的試劑和樣品在加到板子上以前都被混合均勻。
板孔變干涸
確保所有孵育期間酶標(biāo)板始終被蓋好。放置一個(gè)潮濕的水盤(pán)(保持清潔，無(wú)菌水)在孵育箱的底部。
洗板不充分
這將導(dǎo)致一些孔沒(méi)有其他孔清洗的好，殘留不同量的未結(jié)合的抗體，使后面的結(jié)果產(chǎn)生不一致。
酶標(biāo)板底部不凈影響吸光度讀取
讀板前小心清潔酶標(biāo)板底部。
顏色變化過(guò)慢
酶標(biāo)板未處于恰當(dāng)?shù)臏囟戎写_保酶標(biāo)板處于室溫，試劑在使用前也處于室溫。
結(jié)合能力太弱
使用前新鮮配制底物溶液。確保儲(chǔ)備液在有效期內(nèi)并且被正確儲(chǔ)存，使用的濃度也是正確的。確保試劑按正確的濃度使用。
溶液污染
例如象過(guò)氧化物酶這類(lèi)污染物的存在，將會(huì)影響底物的反應(yīng)，避免使用含有這些防腐劑的試劑。
